[发明专利]从有蓝藻爆发的水体中分离纯化噬藻体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离纯化噬藻体的方法，特别涉及一种从有蓝藻爆发的水体中分离纯化噬藻体的方法。

背景技术

噬藻体是一类感染蓝藻的病毒，形态上同噬菌体，近期的研究表明，噬藻体作为水体环境中活跃的动态因子，在控制水体初级生产力和有害藻类水华方面能发挥着重要的作用，甚至影响水体生态系统中的食物链，因此如何有效的分离纯化出噬藻体，对于研究水体中噬藻体的生理生态学特性具有重要的意义。而天然水体中成分复杂，微生物种类繁多，如何高效的分离纯化出噬藻体具有一定的难度，目前未见相关的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从有蓝藻爆发的水体中分离纯化噬藻体的方法，本方法的优点是：1)采用本方法能成功地从蓝藻爆发水体中分离纯化得到噬藻体；2)采用本方法分离纯化噬藻体不会对环境造成污染。

一种从有蓝藻爆发的水体中分离纯化噬藻体的方法，其特征在于采用如下步骤：

A)采集蓝藻爆发天然水域表层的水样，于冰浴条件下保存，水样先后通过孔径为0.80μm，0.45μm，0.22μm的微孔滤膜后，经超滤系统浓缩成浓缩水样，其浓缩倍数为200～1000倍；

B)配制浓缩水样与对数期的铜绿微囊藻液的混合液，在光照强度为2000lux，温度为30℃，光暗周期为12h∶12h条件下培养3～7天，得到铜绿微囊藻裂解液，当颜色变为透明时，判定水样中含有噬藻体；组成混合液的浓缩水样与对数期的铜绿微囊藻液的体积比为1∶9；

C)将上述铜绿微囊藻裂解液经0.22μm的微孔滤膜过滤，除去铜绿微囊藻裂解碎片，经超滤系统浓缩后，用CsCl密度梯度离心纯化噬藻体，吸取CsCl密度梯度中的病毒条带放在SM缓冲液中透析，此时得到的透析液即为噬藻体纯化液。

表层水样是指从蓝藻爆发天然水域表层深度不超过0.5米处采集的水样。

对数期的铜绿微囊藻液指铜绿微囊藻适应了新的环境，开始大量快速繁殖，数量快速增长，呈对数或指数曲线形状，此时的藻细胞活力较强，是进行试验研究的良好材料。

同现有技术相比，本发明的优点是：1)采用本方法能成功地从蓝藻爆发水体中分离纯化得到噬藻体；2)采用本方法分离纯化噬藻体不会对环境造成污染。

附图说明

图1为反映噬藻体感染规律的一步生长曲线图，横坐标为噬藻体培养时间(h)，纵坐标为嗜藻斑形成单位数(个/mL)。

具体实施方式

实施例1：

一种从有蓝藻爆发的水体中分离纯化噬藻体的方法，其特征在于采用如下步骤：

A)采集蓝藻爆发天然水域表层的水样，于冰浴条件下保存，水样先后通过孔径为0.80μm，0.45μm，0.22μm的微孔滤膜后，经超滤系统浓缩成浓缩水样，其浓缩倍数为200倍；

B)配制浓缩水样与对数期的铜绿微囊藻液的混合液，在光照强度为2000lux，温度为30℃，光暗周期为12h∶12h条件下培养7天，得到铜绿微囊藻裂解液，当颜色变为透明时，判定水样中含有噬藻体；组成混合液的浓缩水样与对数期的铜绿微囊藻液的体积比为1∶9；

C)将上述铜绿微囊藻裂解液经0.22μm的微孔滤膜过滤，除去铜绿微囊藻裂解碎片，经超滤系统浓缩后，用CsCl密度梯度离心纯化噬藻体，吸取CsCl密度梯度中的病毒条带放在SM缓冲液中透析，此时得到的透析液即为噬藻体纯化液。

表层水样是指从蓝藻爆发天然水域表层深度不超过0.5米处采集的水样。

实施例2：

一种从有蓝藻爆发的水体中分离纯化噬藻体的方法，其特征在于采用如下步骤：

A)采集蓝藻爆发天然水域表层的水样，于冰浴条件下保存，水样先后通过孔径为0.80μm，0.45μm，0.22μm的微孔滤膜后，经超滤系统浓缩成浓缩水样，其浓缩倍数为1000倍；

B)配制浓缩水样与对数期的铜绿微囊藻液的混合液，在光照强度为2000lux，温度为30℃，光暗周期为12h∶12h条件下培养3天，得到铜绿微囊藻裂解液，当颜色变为透明时，判定水样中含有噬藻体；组成混合液的浓缩水样与对数期的铜绿微囊藻液的体积比为1∶9；

C)将上述铜绿微囊藻裂解液经0.22μm的微孔滤膜过滤，除去铜绿微囊藻裂解碎片，经超滤系统浓缩后，用CsCl密度梯度离心纯化噬藻体，吸取CsCl密度梯度中的病毒条带放在SM缓冲液中透析，此时得到的透析液即为噬藻体纯化液。

表层水样是指从蓝藻爆发天然水域表层深度不超过0.5米处采集的水样。

实施例3：

一种从有蓝藻爆发的水体中分离纯化噬藻体的方法，其特征在于采用如下步骤：