[发明专利]一种从组织中分离富集靶细胞的方法

权利要求书

1.一种从组织中分离富集靶细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将组织块在缓冲液中制备成单细胞的悬浮液；

（2）对单细胞的悬浮液进行离心处理，除去上清液，加入胰蛋白酶处理；接着加入含有10%动物血清的细胞培养基，离心处理，除去上清液；最后加入含有10%动物血清的细胞培养基，转移到试管内；

（3）向试管内加入磁珠，磁珠与悬浮液中的靶细胞相结合，在4℃或室温下培养30～60分钟；所述磁珠含有单一的靶细胞的表面抗体、细胞质内抗体或者两者都有，磁珠粒径为50nM～4.5uM，磁珠的浓度为单细胞悬浮液浓度的十分之一到五百分之一；

（4）利用磁场器械将靶细胞从细胞悬浮液中分离富集出来；

（5）加入缓冲液，清洗掉非特异性结合的非靶细胞；

（6）抽离磁场，让与磁珠结合的靶细胞从磁场中释放出来，从而得到靶细胞。

2. 根据权利要求1所述的从组织中分离富集靶细胞的方法，其特征在于，所述步骤（2）后，经保-80℃以下或液态氮罐中保存过的样品；当需要对保存的组织进行靶细胞的分离和富集时，从液态氮罐中取出阳样品，使组织样品溶解，加入相当于试管内样品体积的5～10倍的蛋白质复性缓冲液，培养10～60分钟后，就可以用来进行靶细胞的分离和富集。

3. 根据权利要求1所述的从组织中分离富集靶细胞的方法，其特征在于，所述组织为血液、骨髓液、组织块。

4. 根据权利要求1所述的从组织中分离富集靶细胞的方法，其特征在于，所述步骤（1）缓冲液为磷酸缓冲液或不含动物血清的细胞培养液。

5.根据权利要求1所述的从组织中分离富集靶细胞的方法，其特征在于，所述步骤（3）中表面抗体为上皮细胞粘附分子抗体，MUC1。

6. 根据权利要求1所述的从组织中分离富集靶细胞的方法，其特征在于，所述步骤（3）中细胞质内抗体为抗细胞角蛋白抗体。

7.根据权利要求1至6任意一项所述的从组织中分离富集靶细胞的方法，其特征在于，所述靶细胞包括癌细胞。