[发明专利]固相多肽合成CW7213的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及CW7213的制备方法，具体涉及CW7213的固相多肽合成的制备方法。

背景技术

中文名：无指盘臭蛙胰岛素释放促进肽

缩写：CW7213

等电点：10.32

分子量：2632.3

结构式：Phe-Leu-Pro-Leu-Leu-Ala-Gly-Leu-Ala-Ala-Asn(Trt)-Phe-Leu-Pro-Lys(boc)-Leu-Phe-Cys(trt)-Lys(boc)-Ile-Thr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(boc)-Gly-OH

糖尿病是以持续高血糖为基本生化特征的综合征。各种原因造成胰岛素相对或绝对缺乏以及不同程度的胰岛素抵抗，使碳水化合物、脂肪及蛋白质代谢紊乱，临床上表现为糖尿病。随着病程的延长，可出现广泛的微血管及大血管病变，导致双目失明、肾功能衰竭、肢端坏疽、心肌梗死及脑血管病变，严重威胁患者的生命。近年来，糖尿病的患病率急剧上升，全世界糖尿病患者已由1997年的1.3亿发展到2005年的2.37亿，我国预计有糖尿病患者6千万。有关专家预测，2025年全球糖尿病患者可达3亿。目前，我国糖尿病的发病率已达20岁以上人群总数的3.2％。

2型糖尿病发病机制复杂，目前普遍认为胰岛素抵抗和β细胞分泌缺陷是2型糖尿病发病机制的2个主要环节。经典的抗2型糖尿病药物存在多种缺陷，不能从根本上治愈糖尿病患者。胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体属于G蛋白偶联胰高血糖素受体家族，广泛分布于胰腺β、δ细胞、胃小凹和小肠黏膜以及心、肺、中枢神经系统。GLP-1与GLP-1受体特异性结合后，主要通过cAMP为第二信使的信号通路发挥血糖调控作用。其主要优点一是具有血糖依赖性的肠促胰岛素分泌作用，从而避免了糖尿病药物治疗中常存在的低血糖症的危险；二是阻止胰腺β细胞退化，刺激β细胞的增值和分化，从根本上改善糖尿病病程的发展。但GLP-1在体内易被二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)降解，半衰期仅2min左右。DPP-Ⅳ是一种丝氨酸蛋白酶，可特异性识别GLP-1的N末端第二位丙氨酸残基，并从此处切除二肽使GLP-1失活。针对内源性GLP-1的优点和不足，人们从GLP-1受体激动剂和DPP-Ⅳ抑制剂两个方面进行新药设计。这类药物将以其独特的降糖活性，在2型糖尿病的治疗中发挥重要的作用。

CW7213是胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，具有多种生理功能：能够降低患者体重，更平稳地控制血糖水平，不会产生低血糖。此外，GLP-1类似物还能维持、并且改善Ⅱ型糖尿病患者的基础和葡萄糖刺激后的β细胞功能，延缓疾病进程。由于这些无可比拟的治疗优点，CW7213有非常广阔的市场前景。

传统的多肽合成方法多为液相合成法或固相boc策略合成法，由于工艺三废较严重，使用剧毒的氟化氢，接肽效率低，反应时间较长，工艺复杂，产品收率较低，不具备大规模生产的能力，而CW7213的制备工艺尚未见报导。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是公开一种固相多肽合成CW7213的制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。

本发明的方法包括如下步骤：

以Fmoc-Gly-WANG树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次以Fmoc保护的氨基酸为单体，以HBTU/HoBT为缩合剂，以DIPEA为催化剂，在砂芯漏斗中通入氮气逐个接上氨基酸，获得保护的二十四肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，同步进行脱侧链保护基团和切肽，加入乙醚沉淀，获得CW7213的粗品，并经C18柱进行分离纯化，再经冷冻干燥，获得产品(包括：醋酸盐、三氟乙酸盐等医学上可用的盐)。

按照本发明优选的方案，依次连接具有Fmoc保护的氨基酸，获得保护的二十四肽树脂，依次包括如下步骤：

(1)将Fmoc-Gly-WANG树脂用DMF浸泡60分钟，使树脂溶胀，树脂的载量为0.48mmol/g；