[发明专利]固相多肽合成CW7213的制备方法

权利要求书

1.一种固相多肽合成CW7213的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：以Fmoc-Gly-WANG树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次以Fmoc保护的氨基酸为单体，以HBTU/HoBT为缩合剂，以DIPEA为催化剂，在砂芯漏斗中通入氮气逐个接上氨基酸，获得保护的二十四肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团，同步进行脱侧链保护基团和切肽，加入乙醚沉淀，获得CW7213的粗品，并经C18柱进行分离纯化，再经冷冻干燥，获得产品(包括：醋酸盐、三氟乙酸盐等医学上可用的盐)。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，获得保护的二十四肽树脂，其间依次脱去Fmoc保护基团的方法包括如下步骤：

(1)将Fmoc-Gly-WANG树脂用DMF浸泡60分钟，使树脂溶胀，树脂的载量为0.48mmol/g；

(2)在上述树脂中，加入脱保护试剂，进行脱保护反应，然后树脂用DMF洗涤，抽干，加入用DMF溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸和HBTU/HoBT的混合物以及DIPEA，进行接肽反应，抽干，用DMF洗涤六次，然后再加入脱保护试剂，进行脱保护反应，再加入用DMF溶解的具有Fmoc保护的氨基酸，如此重复，最后一个氨基酸脱保护后用DMF洗涤四次、二氯甲烷洗涤两次、甲醇洗涤两次，获得Fmoc-Phe-Leu-Pro-Leu-Leu-Ala-Gly-Leu-Ala-Ala-Asn(Trt)-Phe-Leu-Pro-Lys(boc)-Leu-Phe-Cys(trt)-Lys(boc)-Ile-Thr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(boc)-Gly-树脂；

所说的具有Fmoc基团的氨基酸，依次为：

(1)Fmoc-Lys(boc)-OH、

(2)Fmoc-Arg(pbf)-OH、

(3)Fmoc-Thr(tbu)-OH、

(4)Fmoc-Ile-OH、

(5)Fmoc-Lys(boc)-OH、

(6)Fmoc-Cys(trt)-OH、

(7)Fmoc-Phe-OH、

(8)Fmoc-Leu-OH、

(9)Fmoc-Lys(boc)-OH、

(10)Fmoc-Pro-OH、

(11)Fmoc-Leu-OH、

(12)Fmoc-Phe-OH、

(13)Fmoc-Asn(trt)-OH、

(14)Fmoc-Ala-OH、

(15)Fmoc-Ala-OH、

(16)Fmoc-Leu-OH、

(17)Fmoc-Gly-OH、

(18)Fmoc-Ala-OH、

(19)Fmoc-Leu-OH、

(20)Fmoc-Leu-OH、

(21)Fmoc-Pro-OH、

(22)Fmoc-Leu-OH、

(23)Fmoc-Phe-OH。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所说的脱保护试剂的组分和体积比为：PIP∶DMF＝1∶4；具有Fmoc保护基团的氨基酸的摩尔数为树脂载量的3倍；HBTU/HoBT的摩尔数为树脂载量的3倍；DIPEA的摩尔数为树脂载量的7倍。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，加入脱保护试剂后，10-30℃反应20分钟；加入用DMF溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸和HBTU/HoBT的混合物以及DIPEA，10-30℃反应1-2小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，同步进行脱侧链保护基团和切肽，加入乙醚沉淀，获得CW7213的粗品，包括如下步骤：

将配制好的切割试剂，加入最后脱去保护的二十四肽树脂中，10-30℃切肽反应2小时，漏斗过滤后得滤液，加入冰乙醚沉淀静置30分钟，抽滤得到多肽沉淀物，室温置于干燥器中，减压干燥10-14小时，获得CW7213粗品。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所说的切割试剂为TFA/EDT/H₂O/TIS＝9.5∶0.2∶0.2∶0.1，体积比；10-30℃切肽反应2小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，CW7213粗品经C18柱进行分离纯化包括如下步骤：将CW7213粗品溶于水溶液中，过滤，滤液经C18柱进行分离纯化，流动相为：A 10％甲醇+90％水+0.1％TFA、B 90％甲醇+10％水+0.1％TFA，体积比；流速为2ml/min；检测波长为：214nm；用制备型高效液相色谱跟踪收集所需要的流出液，样品峰合并后旋蒸并冷冻干燥，获得成品(MW：2632.3)。