[发明专利]螺旋藻中β-胡萝卜素的HPLC测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种β-胡萝卜素的测定方法，特别是涉及一种螺旋藻中β-胡萝卜素含量的测定方法。

背景技术

β-胡萝卜素(C40H56)是类胡萝卜素之一，也是橘黄色脂溶性化合物，β-胡萝卜素会被人体转换成维生素A，6微克β-胡萝卜素相当于1微克维生素A，β-胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素，在抗癌、预防心血管疾病、白内障及抗氧化上有显著的功能，并进而防止老化和衰老引起的多种退化性疾病。

β-胡萝卜素的测定方法是石油醚-丙酮提取、三氧化二铝柱层析、高效液相色谱法及纸层析法，石油醚-丙酮提取、三氧化二铝柱层析此法操作繁琐，同时因为不标定标准品溶液，容易将检测值测高，纸层析法因为前处理繁琐，用分光光度法测定不如高效液相色谱法精确，均影响结果准确性。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种螺旋藻中β-胡萝卜素含量的测定方法，克服现有技术中a.将结果检测偏高，b.样品处理中的乳化现象，c.β-胡萝卜素降解的问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种螺旋藻中β-胡萝卜素的测定方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：采用皂化提取法溶解螺旋藻中的β-胡萝卜素，具体为：称取螺旋藻样品，加入乙醇溶液、抗坏血酸和氢氧化钾溶液于恒温水浴锅中回流，所得溶液转移至分液漏斗用30-60℃石油醚萃取皂化提取液中的β-胡萝卜素，取上层石油醚层，用水洗涤3-5次，弃去水层，将石油醚层通过无水硫酸钠进行干燥，然后转移至容量瓶定容即得；

(2)标准曲线的制备：

A、标准储备液：准确称取β-胡萝卜素标准品于容量瓶中，加氯仿溶解，用石油醚定容，配制成胡萝卜素储备液，于-18℃避光保存，临用前标定；

标准溶液的标定：取标准储备液，用正己烷定容，混匀，测定其吸光值，以正己烷为空白，入射光波长450nm，平行测定三份，取均值。按下列公式计算溶液浓度：

X=AE×100.05]]>

X：胡萝卜标准溶液浓度，单位为微克每毫升

A：吸光值

E：β-胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450nm，比色杯厚度1cm，溶液浓度为1ug/ml的吸光系数，为0.2368

测定过程中稀释倍数的换算系数

B、取胡萝卜素储备液配制不同浓度的β-胡萝卜素溶液，分别上HPLC测定，求得峰面积绘制标准曲线；

C、标准使用液：量取现标定的β-胡萝卜素标准储备液配制标准使用液；

(3)利用步骤(2)C中确定的标准使用液的浓度作为外标计算待测液中β-胡萝卜素的含量：

X=c×Vm×10001000×10]]>

按照步骤(1)所述方法制备供试品待测液，

X--试样中β-胡萝卜素的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)

C-试样测定液中β-胡萝卜素的浓度，单位为微克每毫升(ng/mL)

m-试样质量或体积，单位为克或毫升(g或mL)。

所述步骤(1)螺旋藻样品为0.1-1g，加入乙醇的体积为25-50ml，抗坏血酸浓度为5％-15％，体积为3-10ml，氢氧化钾溶液浓度为40-60％，体积为8-15ml，所述的水浴温度为80-100℃，所述的皂化时间为0.5-1.5h。

所述步骤(1)中石油醚萃取皂化提取液中的β-胡萝卜素体积为40-70ml，震摇1-5min；所用水的体积为5ml，无水硫酸钠6-10g。

HPLC色谱条件是：

流动相：甲醇85-95体积份

乙腈5-15体积份