[发明专利]特异于流感H5血凝素主要中和表位的单克隆抗体

说明书

序列提交

本申请连同电子形式的序列表一起提交。所述序列表命名为2577_203_sequence_listing.txt，创建于在2010年8月20日。电子形式序列表的信息以其整体援引嫁入本文。

发明背景

本发明涉及特异于流感H5血凝素主要中和表位的鼠单克隆抗体4C2或者嵌合或人源化单克隆抗体及其活性片段。本发明还涉及使用所述鼠或者嵌合或人源化单克隆抗体或其片段来预防和治疗H5N1流感的方法和组合物。

本文用于说明本发明背景或提供有关实施的补充细节的出版物和其他材料被引入作为参考，为了方便起见在文献目录中分别分组。

最近出现的甲型流感病毒H5N1菌株以及它们在人类中造成的高死亡率引起了关于未来流感大流行的忧虑。抗流行性H5N1菌株的预防和治疗措施引起大量兴趣，全世界范围都在努力来预防另一次大流行的爆发。但现有的疫苗策略受到流感菌株抗原变异的阻碍。需要抗体内源合成的现有疫苗策略在大流行病情况下无法提供针对H5N1感染的立刻预防。目前得到许可的抗病毒药物包括M2离子通道抑制剂(Rimantidine和Amantidine)和神经氨酸酶抑制剂(Oseltamivir和Zanamivir)。已知H5N1病毒对M2离子通道抑制剂有抗性(Beigel等,2005)。H5N1病毒的新毒株正被分离，它们还对神经氨酸酶抑制剂即oseltamivir和zanamivir有抗性(Le等,2005,de Jong和Hien,2006)。神经氨酸酶抑制剂还需要高剂量和延长的治疗(de Jong和Hien,2006)，增加了有害副作用的可能性。因此，流感治疗的交替性策略被准许。

使用单克隆抗体(mAb)的被动免疫疗法已经被看作治疗许多传染病的可靠选择。目前，对使用抗流感病毒HA1蛋白的中和抗体的治疗方法存在大量关注。这种蛋白方便作为靶标，因为它在病毒的表面，针对该蛋白的抗体可以有效的中和病毒。因此，抗H5血凝素(HA)中和表位的单克隆抗体可以是激活人免疫的有吸引力的选择，尤其是针对那些处于流感感染高风险的个体，即，对主动免疫反应较差的免疫受损患者，婴儿，幼儿或老人。通过输注人恢复期血清的被动免疫与流感大流行期间死亡率的50%降低有关，证明有效的抵抗H5N1甲型流感病毒感染(Kong and Zhou,2004;Luke等,2006)。重要的是任何mAb产品应当提供抗H5N1流感流行毒株的广泛预防，并且应当防止体内中和渗漏突变体(escape mutant)的选择。

发明概述

本发明涉及特异于流感H5血凝素主要中和表位的单克隆抗体及其活性片段。本发明还涉及使用所述单克隆抗体或其片段预防和治疗H5N1流感的方法和组合物。

因此，在第一个方面，本发明提供特异于流感H5血凝素主要中和表位的单克隆抗体及其活性片段，即抗原结合片段(本文中也称为抗体片段)。在一个实施方案中，单克隆抗体是鼠单克隆抗体4C2。在第二个实施方案中，单克隆抗体是嵌合或人源化的单克隆抗体。具体来说，所述嵌合或人源化的单克隆抗体特异性地结合鼠单克隆抗体4C2所特异性结合的H5血凝素的构象表位。在一个实施方案中，单克隆抗体(鼠单克隆抗体或嵌合或人源化的单克隆抗体)或其片段特异性结合H5血凝素(HA)的构象表位，其中所述构象表位包含成熟HA蛋白的氨基酸155(Ser)和189(Arg)。在另一个实施方案中，轻链可变区的互补决定区(CDR)(LCDR)在SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列之内(本文中也称为HM448828，其是小鼠轻链可变区的氨基酸序列)。在另外的实施方案中，轻链可变CDR的氨基酸序列是∶LCDR1:QDISGH(SEQ ID NO:5);LCDR2:HGT(SEQ ID NO:6);和LCDR3:VQYVQFPWT(SEQ ID NO:7)。在一个实施方案中，重链可变区的互补决定区(CDR)(HCDR)在SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列之内(本文中也称为HM448827，其是小鼠重链可变区的氨基酸序列)。在另一个实施方案中，重链可变CDR的氨基酸序列是∶HCDR1:GYTFTTYW(SEQ ID NO:8);HCDR2:IDPYDSET(SEQ ID NO:9);和HCDR3:VRGGSTVAYFGV(SEQ ID NO:10)。