[发明专利]用于分析血液样品的方法和系统

说明书

技术领域

本发明一般涉及通过使用颗粒分析仪来分析血液样品的方法和系统，更多具体地讲，涉及确定网织红细胞和难以血影化(hard-to-ghost)细胞的方法和系统。

背景技术

每年，有几百万的美国人会受到血液病的影响。血液病理学的例子包括：多种血液学恶性肿瘤，比如白血病和淋巴瘤；血红蛋白病，其包括许多种源于遗传的贫血症，比如地中海贫血、库利(Cooley)病、以及镰刀形红细胞性贫血(HbS病)；以及多种凝血和出血病症。血液异常还可以是与其他疾病比如HIV/AIDS、恶性肿瘤、以及自身免疫紊乱有关的次级后果。这些疾病中的大部分具有显著的病态和死亡率，并且通常会引起受影响的病人中严重的疼痛。这些紊乱的早期诊断很关键，以使得罹患该疾病的病人能够接受适当的处理和疾病治疗。

血液是特殊的体液，其可向身体中的细胞输送必需的物质比如营养和氧气，并且从这些相同的细胞中运出废物。血液中这种主要细胞是红细胞，即红血细胞或者红细胞。在外周血涂片中，红细胞由蛋白质血红蛋白衍生了它们的微红色，并且通常呈现具有染色暗淡的中心区域的球形或者椭圆形。它们的两面凹的形态增加了细胞的表面积，并且有助于氧和二氧化碳从细胞中的扩散。典型的红细胞的寿命为约120天。

红细胞由在骨髓中具核的前体细胞发展而来。未成熟的红细胞，即，网织红细胞，具有细胞器，这些细胞器对于提高血红蛋白含量和气体携载能力有贡献。当特殊的染色被用于染色网织红细胞的多聚核糖体或者核糖核酸(RNA)时，能够在外周血涂片中识别出网织红细胞。在典型的状况下，网织红细胞在样品中占红血细胞的大约1-2％。然而，在身体需要的特定周期期间，网织红细胞计数可以上升。

血液测试能够被用于确定生理学和生物化学状态比如疾病、矿物质含量、药物效力、以及器官功能。在证实或者帮助证实疾病比如各种形式贫血症或者急性内出血的诊断中，网织红细胞的确定可能是至关重要的。

自动网织红细胞分析能够通过使用颗粒分析仪比如流式细胞仪或者血液分析仪而进行。颗粒分析仪的例子包括，购自贝克曼考尔特公司的UniCelDxH 800系统和购自Sysmex公司的XT-2000。用于流式细胞计数或者血液学分析的血液样品的制备通常涉及到下述步骤：获取全血样品，进行用活体染料比如新亚甲基蓝(NMB)孵育血液样品的步骤和用可去除血红蛋白的低渗性酸稀释血液样品的步骤中的一个步骤或者两个步骤。所述染色可沉淀出红细胞内部的RNA。用低渗性酸染色可去除使血红蛋白，留下细胞内被染色的RNA。除去血红蛋白的该方法通常被称作“血影(化)(ghosting)”。然后使该血液样品或其部分经受在颗粒分析仪的流式池中的分析。典型地，鞘液体(sheath fluid)中的细胞一个接一个地经过流式池中的点，它们在该点处被一种以上光束探询。对于每个经过的细胞产生几个测量值。单个细胞的探询(interrogation)被称为细胞事件(cell event)。每个细胞事件通常所记录的测量值包括正向光散射、轴向光损失、以及荧光。一些颗粒分析仪还收集直流阻抗(DC)测量值，其是细胞施加多少阻抗的测量。该DC测量值是通过施加使得细胞膜不被渗透、并且没有电流穿过细胞时的最大电流而得到的，也被称为Coulter体积或容积。

发明内容

本申请针对的是颗粒分析仪数据的分析。在一种实施方式中，对血细胞样品中的难以血影化细胞进行计数的自动方法可能包括：将血细胞样品与核酸染色剂和血影化试剂相混合，以便从红血细胞中除去血红蛋白，借此产生经血影化处理的血细胞样品；使经血影化处理的血细胞样品穿过细胞计数流动池(cytometric flow cell)；通过使用两种不同的光学测量法，分析细胞计数流动池中的经血影化处理的血细胞样品；通过检测两种不同的光学测量值，区分难以血影化细胞；以及对难以血影化细胞进行计数。

在另一个实施方式中，分析血液样品的方法可能包括：通过包含轴向光损失测量的检测，测量流动池中的血液样品，从而产生事件数据；以轴向光损失测量为基础，利用事件数据，识别难以血影化细胞种群；从所述事件数据中滤出(filter-out)难以血影化细胞种群；以及分析事件数据，以便识别血细胞分布模式。在滤出难以血影化细胞之后，能够进行包含网织红细胞分析的分析。