[发明专利]用于诊断和筛选与HPV有关的癌症的高通量细胞基HPV免疫测定

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2010年1月8日提交的、名称为“用于诊断和筛选与HPV有关的癌症的高通量细胞基HPV免疫测定”的美国临时申请序列号61/335,540的权益，其内容通过引用被并入本文，为了各种目的。

发明背景

宫颈癌是全球女性癌症死亡的第二最常见的原因，每年产生约50万新病例，累计造成约25万死亡例。在美国，宫颈癌死亡率由于宫颈癌筛查项目已大幅下降，宫颈癌筛查项目检测癌前状态，以便它们可以在发展成癌症之前被治疗。当前，宫颈癌筛查的典范基于帕氏试验(Pap test)，其是一种基于细胞学的试验，从子宫颈刮下细胞并在显微镜下检查以检测表明发育异常细胞生长的变化。该试验由于明显的观察者间变化性而具有主观性，并且其受低灵敏性和高假阳性结果的限制。关于宫颈细胞学假阴性率的报道差异很大，从低至1.6%到大约28%。在美国，每年约有400万异常帕氏试验被诊断为意义不明确的非典型鳞状细胞(ASC-US)，非典型鳞状细胞不能排除高级鳞状上皮内病变(ASC-H)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)或非典型腺细胞(AGC)。

在当前的实践指导方针下，对这些病例进行阴道镜检查，以进一步识别将具有临床上明显的高级病变(CIN2/3)或在宫颈活检时具有子宫颈内瘤形成的患者亚组。根据一些报道，患有细胞学诊断的ASC-US (在美国每年超过200万例)的患者在宫颈活检时仅有5%到17%的可能性成为潜在的CIN2/3，而在LSIL(在美国每年约160万例)中，发现CIN2/3高达25%。这些数据表明，在阴道涂片时患有ASC-US或LSIL的约300万病例不需要阴道镜检查。尽管阴道镜活组织检查一直以来被视为黄金标准，但最近的报道表明，由于取样或诊断错误，宫颈活检可能遗漏33%到50%的高等级疾病。因此，可能难以区分假阳性宫颈细胞学结果和假阴性活组织检查结果。因而，极需一种检测来鉴定高级发育异常，以将可以最大受益于本干预的患者分类。

虽然大部分低度宫颈发育异常自动退化而不导致宫颈癌，但发育异常可用作需要提高警惕的征兆。CINl是最常见和最良性形式的宫颈上皮内瘤形成，其通常会在两年内自然分解。正因如此，LSIL结果可用简单的“观望和等待”的理念来处理。然而，因有12-16％的机会发展成更严重的发育异常，医生可能希望通过阴道镜检查用活组织检查来更侵袭性地追踪结果。如果发育异常发展，则治疗可能是必要的。因此，需要一种方法来原位检测人乳突病毒HPV癌蛋白。它会特别有助于在ASC-US或LSIL或CINl患者中检测高度发育异常细胞以及鉴定潜在的CIN2或以上的那些患者，其可受益于立即干预并避免与“等待和观望”方法伴随的焦虑。

人乳头瘤病毒(HPV)对特定上皮细胞的感染以及产生的上皮增生对宫颈癌发生发挥重要的作用。发现约99%例确诊宫颈癌病例与以活组织检查确认的鳞状上皮内病变(SIL)或宫颈上皮内瘤形成(CIN)的HPV感染有关。HPV感染——主要通过性接触传播——的发生率在年轻女性中最高，并且，世界上目前约有2,000万性活跃男女被感染。约1%的群体具有生殖器疣突，而4%的女性具有宫颈癌前病变，如低度鳞状上皮内病变(LSIL)或高级鳞状上皮内病变(HSIL)或意义不明确的非典型鳞状细胞(ASC-US)。

这些病变，优选在年龄介于35-40岁的女性中观察到的病变均伴随发展成浸润性宫颈癌的高风险。一般认为，持续HPV感染对于发展成上皮癌前病变是必要的。然而，在感染有高风险HPV菌株的女性中，LSIL并不总是发展成HSIL。大部分被诊断有LSIL的人类对象病情都会缓解。虽然99.7％的宫颈癌为HPV阳性，但病毒基因组需整合到宿主基因组，以促进触发HSIL或癌发展的基因的表达。事实上，每10个患有持续HPV感染的妇女中，只有一个发展为高级CIN病变，如宫颈上皮内瘤形成(CIN)2级和3级(分别为CIN2和CIN3)，在某些情况下，其最终发展为子宫颈癌。

由HPV感染引起的疾病分期包括早期HPV感染、晚期HPV感染、意义不明确的非典型鳞状细胞(ASC-US)、非典型鳞状细胞，不能排除HSIL(ASC-H)、非典型腺细胞(AGC)、低级鳞状上皮内病变(LSIL)、高级鳞状上皮内病变(HSIL)、分别代表轻度、中度或严重细胞发育异常的宫颈内赘生物CINl、CIN2、CIN3、浸润性宫颈癌、腺癌或鳞状细胞癌(SCC)。