[发明专利]用于CD34-阴性干细胞的扩增培养基

权利要求书

1.细胞生长培养基，其包含：

(a)无直径大于0.22μm的固体物质的人类血小板裂解物，其中所述裂解物构成所述细胞生长培养基的总体积的2％至15％；

(b)无直径大于0.22μm的固体物质的人类新鲜冰冻血浆(FFP)滤出物，其中所述FFP滤出物构成所述细胞生长培养基的总体积的1％至10％；

(c)浓度为所述细胞生长培养基的0U/ml至10U/ml的肝素；

(d)浓度为0.5mM至10mM的L-谷氨酰胺；和

(e)适用于哺乳动物细胞生长的无血清低葡萄糖培养基，其中所述无血清低葡萄糖培养基构成所述细胞生长培养基的总体积的75％至97％，且所述无血清低葡萄糖培养基可包含部分(d)的L-谷氨酰胺；

其中所述细胞生长培养基允许人类CD34^-干细胞的扩增，所得经扩增的CD34^-干细胞保持分化的能力。

2.如权利要求1所述的细胞生长培养基，其中根据下列步骤制备部分(a)的血小板裂解物：

(i)冷冻人类血小板浓缩物，从而使其中的血小板裂解；

(ii)融化所得经裂解的血小板；

(iii)以适合使其中的固体物质成丸的速度和持续时间离心融化的经裂解的血小板；

(iv)以适合使其中的固体物质成丸的速度和持续时间再离心来自步骤(iii)的上清液；和

(v)使用孔径渐减的过滤器至少两次过滤来自步骤(iv)的上清液，其中使用具有至少5μm的孔的过滤器实施第一次过滤，和使用具有不大于0.22μm的孔的过滤器实施最后一次过滤。

3.如权利要求2所述的细胞生长培养基，其中如下制备步骤(i)的人类血小板浓缩物：离心血小板并由此使其成丸；分离成丸的血小板和液相；并在FFP中重悬得到的血小板。

4.如权利要求1～3之一所述的细胞生长培养基，其中如下制备部分(b)的FFP滤出液：融化人类FFP；以适合使其液体部分和固体部分分离的速度和持续时间离心所得融化的FFP；和使用孔径渐减的过滤器至少两次过滤得到的液体部分，其中使用具有至少5μm的孔的过滤器实施第一次过滤，和使用具有不大于0.22μm的孔的过滤器实施最后一次过滤。

5.如权利要求1～3之一所述的细胞生长培养基，其中如下制备部分(b)的FFP滤出液：(i)融化人类FFP；(ii)冷冻融化的人类FFP；(iii)融化所得的人类FFP；和(iv)以适合使其液体部分和固体部分分离的速度和持续时间离心所得融化的FFP。

6.如权利要求5所述的细胞生长培养基，其中在离心步骤(iv)之前至少再一次冷冻和融化来自步骤(iii)的融化的FFP。

7.如权利要求5或6之一所述的细胞生长培养基，其中省略对得自步骤(iv)的液体部分的过滤。

8.如权利要求1～7之一所述的细胞生长培养基，其中所述细胞生长培养基不含动物血清。

9.如权利要求1～8之一所述的细胞生长培养基，其中所述血小板裂解物和FFP滤出物与血型抗原ABO和Rh相匹配。

10.细胞生长培养基补充物，其包含：

(a)无直径大于0.22μm的固体物质的人类血小板裂解物，其中所述裂解物构成所述细胞生长培养基补充物的总体积的17％至94％；和

(b)无直径大于0.22μm的固体物质的人类新鲜冰冻血浆(FFP)滤出物，其中所述FFP滤出物构成所述细胞生长培养基补充物的总体积的6％至83％；

其中在将所述细胞生长培养基补充物与肝素和含L-谷氨酰胺的、适用于哺乳动物细胞生长的无血清低葡萄糖培养基组合，从而构成细胞生长培养基时，所得到的细胞生长培养基允许人类CD34^-干细胞的扩增，且所得到的经扩增的CD34^-干细胞保持分化的能力，所述细胞生长培养基包含(i)3体积％至25体积％的细胞生长培养基补充物；(ii)浓度为0U/ml至10U/ml的肝素；和(iii)浓度为0.5mM至10mM的L-谷氨酰胺。