[发明专利]海藻细胞核基因组的同源组合

说明书

发明人：O基利安和B维克

交叉引用

本申请与2009年6月8日提交的标题为“海藻细胞转化的基于VCP的载体”的第12/480,635号美国非临时申请相关，本申请通过引用将其纳入。

本申请与2009年6月8日提交的标题为“海藻细胞的转化”的第12/480,611号美国非临时申请相关，本申请通过引用将其纳入。

关于序列表

本申请同时提交序列表，其为本申请内容的一部分。

发明背景

发明领域

本发明涉及分子生物学，更具体的，涉及外源DNA元素在海藻细胞中的表达。

相关技术的描述

对一个细胞的DNA操作可以赋予这个细胞新的功能。比如，一个转化细胞(也就是一个吸收了外源DNA的细胞)可以比野生型细胞更加强壮。对很多所谓的生物系统模型(即一些已被充分研究的生物体)而言，已经开发出了用于转化它们的DNA元素。对于其他尚未充分了解的生物体，转化是一个重要事件，是推进基因工程的必要前提。需要对这些生物体进行有效的、非随机转化使得这项挑战变得更为复杂。因此，需要对海藻细胞核基因组进行同源重组的方法。

发明概述

本发明提供并例举了将脱氧核糖核酸(DNA)导入海藻细胞细胞核的方法。可以制备这样一个转化结构，该结构具有与相应第一细胞核DNA序列相似的第一DNA序列，与相应第二细胞核DNA序列相似的第二DNA序列，和在该转化结构中第一和第二DNA序列之间插入的感兴趣的DNA序列。可对位于相应第一和第二细胞核DNA序列之间的目标DNA序列进行转化，从而以感兴趣的DNA序列取代目标DNA序列。在进一步的实施例中，感兴趣的DNA序列可能包括抗生素抗性标记，启动子序列和抗生素抗性标记，或者代谢物营养同化或者生物合成基因。该海藻细胞的表型特征可能被改变或者获得新的特征。

本发明提供并例举了一种转化结构，该转化结构具有与相应第一海藻细胞核DNA序列相似的第一DNA序列，与相应第二海藻细胞核DNA序列相似的第二DNA序列，和在该转化结构中第一和第二DNA序列之间插入的感兴趣的DNA序列。根据进一步的实施例，感兴趣DNA序列可以包含削弱或者破坏代谢物营养同化或生物合成基因的野生型功能的DNA。

附图说明

图1显示，根据实施例之一，如何用例举的脱氧核糖核酸(DNA)序列向海藻细胞核导入DNA。

图2是一个流程图，例举一种海藻细胞核基因组同源重组的方法。

图3显示一例DNA序列( )，该序列包括硝酸盐还原酶基因的至少一部分。

图4显示一例转化结构(2)，其中包含硝酸盐还原酶DNA序列作为转化结构的两侧序列。

图5是显示几个转化株分子遗传学分析结果的凝胶照片。

发明的详细描述

图1显示，根据实施例之一，如何用例举的脱氧核糖核酸(DNA)序列向海藻细胞核导入DNA。图1中显示了一个转化结构110，海藻细胞核DNA 120，和转化了的转化海藻细胞核DNA 130。

转化结构110包含第一DNA序列A’，其在长度和序列上与海藻细胞核DNA 120中的第一海藻细胞核DNA序列A相似。转化结构110包含第二DNA序列C’，其在长度和序列上与海藻细胞核DNA 120中的第二海藻细胞核DNA序列C相似。转化结构110还包含感兴趣DNA序列X，其插在转化结构110的第一DNA序列A’和第二DNA序列C’之间。

在一例将DNA导入海藻细胞细胞核方法中，制备诸如示例性转化结构110这样的转化结构。然后，可用转化结构110来转化位于细胞核DNA 120的第一序列A和第二序列C中间的目标DNA序列B，导致目标DNA序列B被感兴趣DNA序列X所取代。

在各种实施例中，分别与对应的细胞核DNA120中第一序列A和/或第二序列C相似的第一DNA序列A’和/或第二C’DNA序列可以是任意碱基对(bps)长度的，范围从大约0bps到大约10,000bps，或者更长。另外，第一DNA序列A’在碱基对长度上与第二DNA序列C’可以相同也可以不同。

各种实施例中，在细胞核DNA 120第一序列A和第二序列C之间的目标DNA序列B可以是任意碱基对(bps)长度的，范围从大约0bps到大约10,000bps，或者更长。