[发明专利]分枝杆菌疫苗

说明书

本发明涉及多核苷酸和融合蛋白、载体、免疫抗原性组合物，并涉及它们在分枝杆菌感染的治疗或预防中的方法和用途，特别是在灵长类动物如人类的分枝杆菌感染的治疗或预防中。

肺结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)及其相近物种组成了较小的分枝杆菌组，已知为肺结核分枝杆菌复合物(MTC)。这个组包含五种不同的物种：肺结核分枝杆菌、田鼠分枝杆菌(M.microti)、牛型分枝杆菌(M.bovis)、卡氏分枝杆菌(M.caneti)和非洲分枝杆菌(M.africanum)。

作为肺结核感染(TB)的病原，肺结核分枝杆菌是全世界细菌感染疾病中最主要的死亡原因-潜伏性感染影响世界人口的三分之一。世界健康组织(WHO)估计全球每年新产生接近九百万TB病例，近两百万人死亡。最大数量的新发TB病例2005年出现在东南亚（全球病例的34%），并且据估计撒哈拉以南非洲的发病率接近350病例每十万人。然而，TB感染并不限于发展中国家：自上世纪八十年代后期开始，英国再次出现大量肺结核病例，因此目前每年新发病例超过8000个-发病率为14.0每十万人。

其它分枝杆菌也在人类和动物中致病，例如引发反刍动物的约内氏疾病的鸟分枝杆菌副结核亚种(M.avium subsp.paratuberculosis)，引起牛肺结核的牛分枝杆菌，引起免疫功能不全患者（例如AIDS患者和骨髓移植患者）患肺结核的鸟分枝杆菌和胞内分枝杆菌(M.intracellulare)，和引起人类麻风病的麻风分枝杆菌(M.leprae)。另一种重要的分枝杆菌是母牛分枝杆菌(M.vaccae)。

针对肺结核分枝杆菌的疫苗的预防有效性有很大差异。目前的肺结核分枝杆菌疫苗，BCG，是牛分枝杆菌的减毒菌株。它对儿童的严重TB并发症有效，但是对于成人的效果差异较大，特别是在不同种族中。BCG的有效性随着年龄的增长而下降，因此对于预防成人的疾病效果并不好，特别是在TB高发地区。BCG疫苗接种已经用于预防结核脑膜炎并帮助防止肺结核分枝杆菌向肺外部位扩散，但是不能预防感染。BCG效果的局限性和TB的全球流行性促使各国研究人员致力于产生新的更有效的疫苗。

很多分枝杆菌亚单位疫苗已经表现出可以诱导较强的免疫应答，同时具有一定程度的保护作用，然而单独使用时的有效性并未优于BCG，因此这些疫苗已经排除在BCG替代品之外。

大多数疫苗通过诱导抗体而起作用，所述抗体对于相关病原的感染具有保护作用。在与特定疫苗抗原联合使用时，有时使用佐剂以加速、延长或增强抗原特异性免疫应答。常用的免疫佐剂包括油和铝盐。

一种这类佐剂是补体4结合蛋白(C4bp)，其为补体途径的调控蛋白。C4bp是较大的糖原蛋白，并且已经从多种哺乳动物中分离得到。在人类体内，C4bp以几种亚型存在于血浆中，主要的亚型是七聚体，由在C-末端连接在一起的七个α-链和一个β-链组成。因为这种“类似蜘蛛或章鱼”的结构，以及预测其具有较长的血清半衰期，已经提出将C4bp与蛋白的融合体作为传送平台，以增强生物活性和免疫原性(WO91/11461)。通过述及将WO91/11461并入本文。EP1795540、WO08/122817和WO05/014654中描述了基于C4bp的疫苗方法的其它实例，所述文献通过述及并入本文。

目前正在研究的产生免疫应答的不同方法为在载体中克隆感兴趣的抗原或抗原表位。通常使用质粒以及病毒载体。例如，表达肺结核分枝杆菌抗原85A的、经过修饰的痘苗安卡拉病毒(MVA)在多种动物模型中表现出能加强BCG应答和保护的能力。临床试验显示MVA85A具备足够的加强对BCG的免疫应答的能力（McShane等.Nat Med 10,1240;2004）。

由于分枝杆菌感染不断增加的危险和全球流行性，需要预防并治疗分枝杆菌感染的替代/改进的方法和组合物。

具体地，在啮齿类动物的初步临床数据已经得到乐观结果的同时，灵长类动物（对于人类更为显著）相应的效果至今尚未令人满意。

类似地，在BCG疫苗仍然作为全球“金标准”的同时，通过加强疫苗提供改进的保护的努力至今为止仍然没有获得令人满意的结果，特别是对于动物（对于灵长类动物如人类更为显著）。

本发明可解决一个或更多的上述问题。