[发明专利]猪放线杆菌抗原

说明书

本申请涉及并要求于2009年11月10日提交的美国临时专利申请61/259,728的优先权。将其教导与内容在本文中作为整体引入作为参考。所有申请均为共同共有。

发明背景

A.技术领域

本发明涉及可用于抑制、治疗、防御(protecting)或预防(preventing)猪放线杆菌感染的方法和组合物。

B.相关技术

在美国，猪放线杆菌(Actinobacillus suis)近来已成为养猪业的新威胁。先前认为猪放线杆菌与“高健康(high health)”猪群的高死亡率有关，现已认识到其为普通猪群的重要病原体。其对年幼动物尤其有害。感染会引起放线杆菌病，且可导致新出生的猪及断奶的猪猝死。断奶猪中的症状包括厌食、发热、发绀、四肢充血、呼吸窘迫、肺炎、坏死性肺炎、持续咳嗽、皮肤损伤和致命性败血症。已知在肥育猪(finishing pig)中会发生肺炎、关节炎、败血症症状、胸膜炎、心包炎和粟粒性脓肿。放线杆菌病还会造成母猪子宫炎和流产。

放线杆菌病的肉眼可见的病变的特征在于在肺、肾、心脏、肝、脾、肠和皮肤中发现损伤；出血合坏死；以及类似于胸膜肺炎的肺损伤。就组织病理学而言，该疾病的特征在于在多种组织的血管中存在细菌性血栓栓塞且伴随纤维素性出血性坏死(fibrinohemorrhagic necrosis)；坏死性支气管肺炎；和胸膜炎。感染的原因及促成因素包括大面积发生猪生殖及呼吸综合征(PRRS)感染、剪牙(teeth clipping)、断尾(de-tailing)、擦破膝盖(scrubbed knees)及经由呼吸、切口或擦伤侵入。

猪放线杆菌是寄居于上呼吸道中的机会性、革兰氏阴性、非运动性的好氧兼性厌氧球杆菌。对从北美猪群中的临床病例获得的猪放线杆菌分离株的基因分型已经揭示了有限的遗传变异性，在从29个不同猪群获得的74株分离株中仅鉴定出13种株系。猪放线杆菌基因型的辛普森多样性指数(Simpson′s diversity index)(还称为物种多样性指数，参见Simpson，1949)为0.64，这意味着使用例如BOX-PCR时，随机分离株具有64％的概率被包括于独特的基因型组中(Simpson，1949；Versalovic等人，1991；Oliveira等人，2007)。例如，与多样性指数为0.93的副猪嗜血杆菌(H.parasuis)(Oliveira等人，2007)相比，猪放线杆菌是相对纯系的。

猪放线杆菌的表型多样性也是相对有限的。迄今仅公开了两种血清变型(即O1及O2)(Rullo、Papp-Szabo和Michael，2006)以及三种荚膜类型(即K1-3)。病原性研究表明，来自血清群O2的分离株往往比O1分离株更有毒力(Slavic、DeLay和Hayes，2000)。用于自身疫苗制备的猪放线杆菌分离株的血清分型还证实，与O1分离株相比较高百分比的O2分离株与临床疾病有关(Slavic、Toffner和Monteiro，2000)。尽管已知猪放线杆菌的一些毒力因子(例如RTX毒素Apx I_var.suis和Apx II_var.suis)，但可触发全身性感染的因子仍有待确定。这些潜在因子中的一些因子包括脂多糖(LPS)和荚膜多糖(CPS)、外膜蛋白A(OmpA)、蛋白酶和铁获取。

目前，没有市售疫苗可用于控制猪放线杆菌，且大多数农场兽医依赖于自身疫苗及抗微生物治疗来控制疾病。需要开发出可强效防御农场中的大多数分离株的疫苗；然而，关于与猪放线杆菌感染的发病机制有关的基因型、血清变型、毒素、蛋白质分布及因子间的联系的必要数据仍有待确定。本文提供这些数据以及针对猪放线杆菌的疫苗及其使用方法。

发明概述

本发明提供可用于防止受试者受到猪放线杆菌感染的新的免疫原性组合物(immunogenic compositions)。这些组合物还可用于抑制、治疗或预防多种株系(strain)或类型的猪放线杆菌的感染。

本发明组合物包含从生长至0.650 OD₆₅₀至0.850 OD₆₅₀的一种或多种猪放线杆菌培养物收集的上清液；和助剂。优选地，该上清液经灭活，最优选经福尔马林(formalin)灭活。该上清液优选还经过滤，例如通过45微米过滤器过滤。在给定情形下可视情况在灭活之前或之后实施过滤。上清液(更优选为经过滤的上清液)基本上不含猪放线杆菌细胞，但可含有多种细胞组分。