[发明专利]使用双链核酸复合物与耐热聚合酶用于合成脱氧核糖核苷酸链的组合物和方法

权利要求书

1.一种用于核酸扩增的阻断双链核酸复合物，其中，所述复合物包括：

a.分离的双链核酸分子，所述分离的双链核酸分子包括：

i.具有包括约9至约40个之间核酸碱基的第一序列的第一核酸链，和

ii.具有包括与所述第一序列互补的约9至约40个之间核酸碱基的第二序列的第二核酸链，其中所述第一核酸链和所述第二核酸链各自具有3’端和5’端，

其中，所述双链核酸分子具有在约50%至约70%之间范围内的胞嘧啶（C）和鸟嘌呤（G）的百分比；以及

b.阻断分子，其中，所述阻断分子共价结合于所述第一核酸链、所述第二核酸链、或两者的所述3’端或所述5’端。

2.根据权利要求1所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述双链核酸分子具有在约25°C至约90°C之间范围内的解链温度。

3.根据权利要求1所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述复合物包括DNA、或RNA。

4.根据权利要求1所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述阻断分子选自由脱氧胸苷、双脱氧核苷酸、3’磷酸化、己二醇、间隔分子、1’2’-双脱氧核糖、2’-O-甲基RNA、和锁核酸（LNA）组成的组。

5.根据权利要求1所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述阻断分子包括：

反向dT。

6.根据权利要求1所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述第一序列或所述第二序列进一步包括一个或多个尿嘧啶碱基。

7.一种用于核酸扩增的阻断双链核酸复合物，其中，所述复合物包括：

a.分离的双链核酸分子，所述分离的双链核酸分子包括：

i.具有包括约9至约40个之间核酸碱基的第一序列的第一核酸链，和

ii.具有包括与所述第一序列互补的约9至约40个之间核酸碱基的第二序列的第二核酸链，其中所述第一核酸链和所述第二核酸链各自具有3’端和5’端，

其中，所述双链核酸分子具有在约25°C至约90°C之间范围内的解链温度；

b.阻断分子，其中所述阻断分子共价结合于所述第一核酸链、所述第二核酸链、或两者的所述3’端或所述5’端。

8.根据权利要求7所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述阻断分子选自由脱氧胸苷、双脱氧核苷酸、3’磷酸化、己二醇、间隔分子、1’2’-双脱氧核糖、2’-O-甲基RNA、和LNA组成的组。

9.一种用于核酸扩增的阻断双链核酸复合物，其中，所述复合物包括：

a.分离的双链核酸分子，所述分离的双链核酸分子包括：

i.第一核酸链，所述第一核酸链具有与下述序列有高于或等于约70%同一性的第一核酸序列，下述序列包括：

a.SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或它们的组合，

b.SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或它们的组合的互补物，或

c.与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或它们的组合杂交的序列；以及

ii.具有包括与所述第一核酸序列互补的约9至约40个之间核酸碱基的第二序列的第二核酸链，其中所述第一核酸链和所述第二核酸链各自具有3’端和5’端，

其中，所述双链核酸分子具有在约25°C至约90°C之间范围内的解链温度；

b.阻断分子，其中所述阻断分子共价结合于所述第一核酸链、所述第二核酸链、或两者的所述3’端或所述5’端。

10.根据权利要求9所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述第一和第二核酸链的所述3’端包括下述阻断分子，其中当所述阻断双链核酸复合物与核酸聚合酶相互作用时，由此降低非特异性扩增产物。

11.根据权利要求9所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述复合物具有约48.9°C的解链温度。

12.根据权利要求9所述的阻断双链核酸复合物，其中，所述第一序列或所述第二序列进一步包括一个或多个尿嘧啶碱基。