[发明专利]包含末端取代的SIRNA化合物

说明书

相关申请

本申请要求2009年11月26日提交的美国临时申请No.61/264668、2010年1月17日提交的No.61/295721和2010年8月9日提交的No.61/372072的权益，所述专利以整体引用方式和出于所有目的并入本文。

发明领域

本发明涉及经修饰的siRNA化合物、包含其的药物组合物以及使用其抑制基因表达的方法。所述化合物和组合物展现有利的特性(包括敲低靶标基因表达的活性)，且用于治疗罹患在其中基因表达具有不利影响的疾病或病况和/或与此疾病或病况相关的症状或有患上该疾病或病况的风险的受试者。

发明背景

本发明受让人的PCT专利公布No.WO2008/104978及WO2009/044392中公开新的siRNA结构，所述专利以全文引用的方式并入本文中。

仍需要展现增强的敲低基因表达的活性、提高的稳定性和/或降低的脱靶效应的活性且有效的siRNA治疗剂。

发明概述

本文所公开的双链RNA(dsRNA)化合物具有可例如增强活性、提高稳定性、降低免疫原性、增强对RISC复合物的负载和/或使毒性最小的结构及修饰；siRNA的新修饰可有利地应用于用于阻止或削弱靶标基因表达的双链RNA。

本文提供用于下调基因表达的双链(双链体)寡核苷酸化合物。本发明在某种程度上基于如下意外的观测结果：包含有义链及互补反义链且在反义链的5’端核苷酸与靶标RNA的核苷酸之间具有错配的双链核酸分子显示有效下调靶标基因的活性。在优选实施方案中，dsRNA包含在反义链的位置1(5’端)上取代而替代胞苷或鸟嘌呤的腺苷、脱氧腺苷、尿苷、脱氧尿苷、核糖胸苷或胸苷。

根据一方面，提供具有下述所列结构(A)的经修饰的双链核酸分子：

(A)    5’N¹-(N)x-Z        3’(反义链)

       3’Z’-N²-(N’)y-z”5’(有义链)

其中N²、N及N’各自为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸或非常规部分；

其中(N)x及(N’)y各自为寡核苷酸，其中每个连续N或N’通过共价键与相邻N或N’连接；

其中x及y各自独立地为17至39的整数；

其中(N’)y的序列与(N)x的序列互补，且(N)x与靶标RNA中的连续序列互补；

其中N¹与(N)x共价结合，且与靶标RNA错配或为与靶标RNA互补的DNA部分；

其中N¹选自由天然或经修饰的尿苷、脱氧核糖尿苷、核糖胸苷、脱氧核糖胸苷、腺苷或脱氧腺苷组成的组的部分；

其中z”可存在或不存在，但若存在，则为共价连接于N²-(N’)y的5’端的加帽部分；及

其中Z及Z’各自独立地存在或不存在，但若存在，则独立地为共价连接于其所存在的所述链的3’端的1-5个连续核苷酸、连续非核苷酸部分或其组合。

在一些实施方案中，(N’)y的序列与(N)x的序列完全互补。在各种实施方案中，N²-(N’)y的序列与N¹-(N)x的序列互补。在一些实施方案中，(N)x包含与靶标RNA中的约17至约39个连续核苷酸完全互补的反义序列。在其它实施方案中，(N)x包含与靶标RNA中的约17至约39个连续核苷酸实质上互补的反义序列。

在一些实施方案中，N¹和N²形成沃森-克里克(Watson-Crick)碱基对。在一些实施方案中，N¹与N²形成非沃森-克里克碱基对。在一些实施方案中，碱基对在核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸之间形成。

在一些实施方案中，x＝y＝18，x＝y＝19或x＝y＝20。在优选实施方案中，x＝y＝18。

在一些实施方案中，N¹与(N)x共价结合且与靶标RNA错配。在各种实施方案中，N¹与(N)x共价结合且为与靶标RNA互补的DNA部分。

在一些实施方案中，处于反义链的位置1的尿苷经选自腺苷、脱氧腺苷、脱氧尿苷、核糖胸苷或脱氧胸苷的N¹取代。在各种实施方案中，N¹选自腺苷、脱氧腺苷或脱氧尿苷。