[发明专利]作为用于前列腺癌诊断和分期的非侵入性标志物的循环miRNA

说明书

本发明涉及用于在患前列腺癌的受试者中分期前列腺癌的方法，所述方法包括(a)在来自所述受试者的样品中测定选自miRNA-375、miRNA-141、miRNA-200b、miRNA-516a-3p和miRNA9^＊的至少一种miRNA的量或者前体分子的量和(b)将如此测定的量与参考量比较。此外，本发明涉及用于鉴定对前列腺癌治疗敏感的受试者的方法，以及用于诊断前列腺癌的方法。本发明还涉及适合于实施本发明方法的试剂盒和装置。 

在西方男性中，前列腺癌是最经常被诊断的恶性肿瘤，并占癌症相关死亡原因的第二位。因为癌症的发展和进展由分子改变驱动，分子特征的分析可以最终允许更好的预测个体癌症的行为。 

前列腺癌具有较高的发生率，但肿瘤侵占性和长期结果是可变的。用于治疗决定的高和低风险前列腺肿瘤的分离在临床情况中仍是未解决的问题。前列腺癌的常见分类基于临床和病理学参数，如术前前列腺特异性抗原(PSA)、直肠指检(DRE)、经直肠的超声检测，以及前列腺活组织检查的组织学分级(Gleason得分)。然而，所有这些参数在其预测能力方面都具有局限。 

对于PCA的检测，前列腺特异性抗原(PSA)的广泛使用导致越来越多的男性诊断为具有器官局限性、低Gleason-得分PCA，所述PCA是可能治愈的。然而，PSA测试的高灵敏性伴随着低特异性，造成许多患者经历不必要的活组织检查。具有正常前列腺病理的男性，在血液中通常具有低于4ng/ml的PSA水平。4ng/ml和10ng/ml之间(‘灰色区’)的PSA水平具有25％的几率具有前列腺癌。结果，在75％的病例中，在该灰色区内具有异常DRE和PSA的男性为阴性，或者似乎不需要进行活组织检查。 

PSA是前列腺体积的指示物，并因此显示出在辅助预测前列腺癌中的 局限性。因此，进行前列腺组织活检以确认诊断并评价肿瘤侵占性。使用Gleason得分(GS)系统根据其细胞分化状态分级肿瘤组织。目前，对于临床风险分层，GS是最可靠的预测标志物。然而，前列腺癌是多病灶疾病。因此，常常在进行活组织检查期间漏掉了肿瘤，并且不知道活组织检测内的肿瘤病灶是否是驱动癌症进展的肿瘤病灶。因此，不得不在根治性前列腺切除术后升级大部分肿瘤。这种升级可能影响治疗决定，因为具有高GS的肿瘤与术后生物化学复发和更差的存活相关。 

各个患者的治疗决定与该个体中存在的前列腺癌的阶段联系。美国泌尿科学协会(American Urological Association)(AUA)研发了前列腺癌扩散的常见分类。AUA系统将前列腺肿瘤分成4个阶段，A至D。将阶段A(前列腺内的微型癌)进一步细分成阶段A1和A2。亚阶段A1是局限于前列腺内一个位点的较好分化的癌。治疗通常是观察、根治性前列腺切除术或者放疗。亚阶段A2是在前列腺内多个位点处的中等至低分化癌。治疗是根治性前列腺切除术或者放疗。还将阶段B(前列腺内可触知的肿块)进一步细分成亚阶段B1和B2。在亚阶段B1中，癌症在前列腺的一叶中形成了小结节。在亚阶段B2中，癌症或者在前列腺的两叶中都形成或发生了大的或者多个结节。亚阶段B1和B2的治疗是根治性前列腺切除术或者放疗。阶段C是涉及大部分或者全部前列腺的较大癌症团块，并且还可以进一步细分成两个亚阶段。在亚阶段C1中，形成连续团块的癌症可能已经延伸至前列腺以外。在亚阶段C2中，癌症形成的连续团块侵入了周围组织。对这两种亚阶段的治疗都是放疗，使用用或不用针对癌症的药物。第四阶段，阶段D是转移性癌症，并也可以细分成两个亚阶段。在亚阶段D1中，癌症在骨盆的淋巴结中存在。在亚阶段D2中，癌症涉及淋巴结以外的组织。对这两种亚阶段的治疗是针对癌症以及疼痛的全身性药物。 

然而，当前的前列腺癌分期方法是有局限的。多至50％最初分期为A2、B或C的前列腺癌实际上是转移性的阶段D。转移瘤的发现是意义重大的，因为具有转移性癌症的患者具有较差的预后，并需要与那些具有局限性癌症的患者显著不同的疗法。具有局限性和转移性前列腺癌的患者的 五年存活率分别为93％和29％。