[发明专利]亲和力成熟的人源化抗CEA单克隆抗体

说明书

发明背景

发明领域

本发明涉及抗原结合分子(ABM)。在具体的实施方案中，本发明涉及对人癌胚抗原(CEA)特异性的重组单克隆抗体，包括嵌合的、灵长类化的(primatized)或人源化的抗体。另外，本发明涉及编码此类ABM的核酸分子，和包含此类核酸分子的载体和宿主细胞。本发明进一步涉及用于生成本发明的ABM的方法，及在疾病的治疗中使用这些ABM的方法。另外，本发明涉及具有改善的治疗特性的具有经修饰的糖基化的ABM，包括具有升高的Fc受体结合和升高的效应器功能，诸如ADCC的抗体。

背景技术

癌胚抗原(CEA)和抗CEA抗体

癌胚抗原(CEA，又称为CEACAM-5或CD66e)是一种具有约180kDa分子量的糖蛋白。CEA是免疫球蛋白超家族的一名成员，并且含有经由糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚与细胞膜连接的7个域(Thompson J.A.，J Clin Lab Anal.5：344-366，1991)。7个域包括单一N端Ig可变域和与Ig恒定域同源的6个域(A1-B1-A2-B2-A3-B3)(Hefta L J等，Cancer Res.52：5647-5655，1992)。

人CEA家族含有29种基因，其中18种得到表达：7种属于CEA亚组，而11种属于妊娠特异性糖蛋白亚组。认为几个CEA亚组成员拥有细胞粘着特性。认为CEA在先天性免疫中具有作用(S.，Semin Cancer Biol.9(2)：67-81(1999))。由于存在与CEA紧密相关的蛋白质，生成与其它紧密相关蛋白质具有最小交叉反应性的对CEA特异性的抗CEA抗体可以是有挑战的。

CEA早就被鉴定为肿瘤相关抗原(Gold和Freedman，J Exp Med.，121：439-462，1965；Berinstein N.L.，J Clin Oncol.，20：2197-2207，2002)。最初分类为仅在胎儿组织中表达的蛋白质，CEA现在已经在几种正常成年组织中鉴定出。这些组织在起源上主要是上皮的，包括胃肠、呼吸、和泌尿生殖道的细胞，及结肠、宫颈、汗腺、和前列腺的细胞(Nap等，Tumour Biol.，9(2-3)：145-53，1988；Nap等，Cancer Res.，52(8)：2329-23339，1992)。

上皮起源的肿瘤及其转移含有CEA作为肿瘤相关抗原。虽然CEA自身的存在不指示转化为癌性细胞，但是CEA的分布是指示的。在正常的组织中，CEA一般在细胞的顶端表面上表达(S.，Semin Cancer Biol.9(2)：67-81(1999))，使得血流中的抗体难以接近它。与正常的组织相反，CEA趋向于在癌性细胞的整个表面上表达(S.，Semin Cancer Biol.9(2)：67-81(1999))。此表达样式变化使CEA在癌性细胞中能被抗体结合。另外，CEA表达在癌性细胞中升高。此外，升高的CEA表达促进升高的细胞间粘着，这可以导致转移(Marshall J.，Semin Oncol.，30(增刊8)：30-6，2003)。

CEA容易自细胞表面切割，并直接或经由淋巴系统自肿瘤脱落入血流中。由于此特性，已经使用血清CEA的水平作为临床标志物以诊断癌症并筛选癌症，特别地结肠直肠癌的复发(Goldenberg D M.，The International Journal of Biological Markers，7：183-188，1992；Chau I.等，J Clin Oncol.，22：1420-1429，2004；Flamini等，Clin Cancer Res；12(23)：6985-6988，2006)。此特性还为使用CEA作为靶物呈现挑战之一，因为血清CEA结合大多数目前可用的抗CEA抗体，这阻碍它们达到细胞表面上的其靶物，并且限制潜在的临床效果。