[发明专利]无甘油的乙醇发酵生产

权利要求书

1.一种转基因的酵母属细胞，所述细胞包含一个或多个重组的核酸序列，该重组的核酸序列编码具有NAD⁺依赖的乙酰化乙醛脱氢酶(EC1.2.1.10)活性的蛋白；

其中，所述细胞缺乏NADH依赖的甘油合成所需的酶活性，或者与所述细胞相应的野生型酵母细胞相比，所述细胞具有降低的与NADH依赖的甘油合成有关的酶活性；且

其中，所述细胞无NAD依赖的甘油3-磷酸脱氢酶活性，或者与所述细胞相应的野生型细胞相比，所述细胞具有降低的NAD依赖的甘油3-磷酸脱氢酶活性；和/或，

其中，所述细胞无磷酸甘油磷酸酶活性，或者与所述细胞相应的野生型细胞相比，所述细胞具有降低的磷酸甘油磷酸酶活性；且

所述细胞的基因组在至少一个基因中包含基因突变，所述基因选自由GPD1、GPD2、GPP1和GPP2所组成的组；且

其中，所述细胞进一步包含一个或多个编码具有乙酰-辅酶A合成酶活性(EC6.2.1.1)的蛋白的核酸序列和一个或多个编码具有NAD⁺依赖的乙醇脱氢酶活性(EC1.1.1.1)的蛋白的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的细胞，其中，至少一个所述NAD⁺依赖的乙酰化乙醛脱氢酶表示为SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：29。

3.根据权利要求2所述的细胞，其中，所述细胞包含编码所述NAD⁺依赖的乙酰化乙醛脱氢酶的核酸序列，所述核酸序列包括根据SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：28或SEQ ID NO：32的序列。

4.根据权利要求1所述的细胞，其中，所述细胞无编码NAD⁺依赖的甘油3-磷酸脱氢酶(EC1.1.1.8)的基因。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的细胞，其中，与相应的野生型酵母基因相比，所述基因突变是彻底缺失选自由GPD1、GPD2、GPP1和GPP2所组成的组中的基因。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的细胞，其中，所述酵母属细胞是酿酒酵母细胞。

7.根据权利要求6所述的细胞，其中，所述细胞是于2009年7月16日收藏在荷兰生物科技研究所培养物保藏中心、保藏编号为CBS125049的酿酒酵母菌株。

8.一种根据权利要求1至7中任一项所述的细胞在乙醇制造中的用途。

9.一种用于制造乙醇的方法，所述方法包括由乙酸盐和由可发酵碳水化合物制造乙醇，其中，所述制造在厌氧条件下使用根据权利要求1所述的细胞进行。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述制造过程在发酵培养基中进行；所述发酵培养基包含乙酸盐和碳水化合物，且所述乙酸盐和碳水化合物的摩尔比为0.7或更少。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中，已通过水解多糖而获得至少一部分所述碳水化合物和至少一部分所述乙酸盐；所述多糖选自由木质纤维素、纤维素、半纤维素和果胶所组成的组。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，木质纤维素类生物质已经水解，从而获得所述可发酵的碳水化合物和乙酸盐。

13.根据权利要求9或10所述的方法，其中，使用选自由葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖和甘露糖所组成的组中的可发酵碳水化合物。