[发明专利]监视亚硫酸氢盐介导的DNA转化的方法

权利要求书

1.用于在DNA甲基化分析期间监视亚硫酸氢盐介导的DNA转化的方法，包括：

（a）提供要分析的样品DNA和至少一种DNA报告分子，其中所述至少一种DNA报告分子包含：

     （i）在它的核苷酸序列中至少一个未甲基化的胞嘧啶残基；以及

     （ii）至少一种标记物；

以及其中所述样品DNA和所述至少一种DNA报告分子在相互流体连接的、空间上分隔的反应区室中提供；

（b）向所述空间上分隔的反应区室添加亚硫酸氢盐，从而介导所述样品DNA和所述至少一种DNA报告分子的核苷酸序列中包含的未甲基化的胞嘧啶残基向尿苷残基的转化；

（c）向所述至少一种DNA报告分子添加尿嘧啶-DNA-糖基化酶，从而介导步骤（b）中获得的尿嘧啶碱基从DNA主干上脱除；

（d）通过热处理来断裂步骤（c）中获得的DNA；以及

（e）检测在步骤（d）期间从所述至少一种合成的DNA报告分子释放的至少一种标记物。

2.权利要求1的方法，进一步包括：

（f） 将（e）中获得的结果与参考值比较。

3.权利要求1或2的方法，其中所述检测步骤在给定的时间期内重复至少一次。

4.权利要求1到3的任一项的方法，其中步骤（e）中获得的结果被用于控制根据步骤（b）的反应的发展。

5.权利要求1到4的任一项的方法，其中所述至少一种DNA报告分子是合成的寡核苷酸。

6.权利要求1到5的任一项的方法，其中所述至少一种合成的DNA报告分子被固定在支持物上。

7.权利要求1到6的任一项的方法，其中所述尿嘧啶-DNA-糖基化酶是热稳定的。

8.权利要求1到7的任一项的方法，其中步骤（c）、（d）和（e）在提供所述至少一种DNA报告分子所采用的同一反应区室中进行。

9.权利要求1到7的任一项的方法，其中步骤（c）、（d）和（e）的任何一个或多个在与提供所述至少一种DNA报告分子所采用的反应区室流体连接的至少一个进一步的空间上分隔的反应区室中进行。

10.权利要求1到9的任一项的方法，其中至少任何一个、优选地所有反应区室装备有一个或更多个温度控制单元，用于控制和调节一个或更多个反应区室内的温度。

11.权利要求1到10的任一项的方法，其中反应区室之间的空间分隔通过半透膜、优选地大小排阻膜或微量渗析膜的方式实现。

12.权利要求1到11的任一项的方法，其中相互流体连接的至少两个空间上分隔的反应区室被整合到传感设备、优选地连续传感设备中。

13.权利要求1到12的任一项中限定的方法用于分析样品DNA的甲基化状态、或在分析样品DNA的甲基化状态时的用途。

14.权利要求13的用途，其中进行DNA甲基化状态的分析用于诊断癌症。

15.权利要求1的报告分子在分析DNA甲基化状态的过程中的用途。