[发明专利]粘液、上皮细胞和其它细胞的细菌粘附和抗粘附

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2009年7月8日提交的美国临时申请系列第61/223,755号的优先权，通过引用将其全部内容并入本文。

发明领域

本发明通常涉及检测、鉴定以及测定粘液和上皮细胞的细菌粘附的方法。具体而言，本发明提供了用于检测和鉴定(例如，肠中存在的)粘液和上皮细胞或者动物中可能存在细菌的其它部分是否存在细菌粘附的测定，以及鉴定和表征粘液和上皮细胞或者动物中可能存在细菌的其它部分的细菌粘附的调节剂(例如，调节剂的效力)的方法。

发明背景

动物的小肠、呼吸道、尿道以及生殖道的上皮细胞覆盖了相对较厚的粘液层，该粘液层包含粘蛋白、很多小的相关蛋白、糖蛋白、脂质以及糖脂。上皮细胞和粘液含有识别特异性细菌粘附蛋白的受体。细菌对上皮细胞的粘附或紧密结合可以促进建群以及细菌致病性。此外，肠粘液和上皮细胞的细菌粘附似乎对微生物菌群内的个体稳定性很重要。

发明概述

本发明通常涉及检测、鉴定以及测定粘液和细胞(例如，上皮细胞)的细菌粘附和抗粘附的方法。具体而言，本发明提供了用于检测和鉴定粘液(例如，肠粘膜内衬)和上皮细胞的细菌粘附的测定，以及鉴定粘液和上皮细胞的细菌粘附的调节剂的方法。所述测定是非放射性的、微生物学安全的，并且是稳定的、易于运输和保存。

因此，在一些实施方案中，本发明提供了试剂盒，其包含用于测定粘液和/或上皮细胞的细菌粘附的非放射性酶联免疫吸附测定(ELISA)。所述试剂盒不局限于特定组分。在一些实施方案中，所述试剂盒包含固相支持体、包含细菌的样品、所述细菌的特异性一抗以及可检测地标记的二抗，其中所述固相支持体上包被了粘液和/或上皮细胞，所述可检测地标记的二抗对于与所述细菌结合的所述一抗是特异性的。在一些实施方案中，所述试剂盒包含能使所述可检测地标记的二抗可视化的底物。在一些实施方案中，所述可检测地标记的二抗包含酶标记。在一些实施方案中，所述底物是在所述酶标记的存在下能提供比色信号、荧光信号或化学发光信号的组合物。在一些实施方案中，所述可检测地标记的二抗包含与过氧化物酶偶联的猪抗IgG免疫球蛋白。在一些实施方案中，所述比色组合物是3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。在一些实施方案中，所述固相支持体是96孔板。在一些实施方案中，所述细菌是大肠杆菌(E.coli)。粘液的实例包括但不限于猪近侧回肠粘液、猪远侧结肠粘液、肉鸡十二指肠粘液和肉鸡盲肠粘液。一抗的实例包括但不限于特异性针对大肠杆菌O和K抗原血清型的HRP偶联多克隆抗体以及特异性针对大肠杆菌O和K抗原血清型的多克隆抗体。二抗的实例包括但不限于亲和纯化的兔抗山羊IgG-HRP、亲和纯化的兔抗山羊IgG-AP、针对山羊IgG的多克隆FITC偶联抗体(H&L)、来自亲和素链霉菌(Streptomyces avidinii)的链霉亲和素-碱性磷酸酶以及来自亲和素链霉菌的链霉亲和素-过氧化物酶。

在某些实施方案中，本发明提供测定细菌和粘液和细菌和上皮细胞之间的粘附和抗粘附的方法的方法。所述方法不局限于用于测定细菌和粘液和细菌和上皮细胞之间的粘附的特定技术。在一些实施方案中，所述方法包括提供包含细菌的样品和粘液，以及在非放射性比色测定中、在能测定所述细菌和粘液之间的粘附的条件下，使所述包含细菌的样品和所述粘液混合。在一些实施方案中，所述非放射性比色测定是ELISA测定。在一些实施方案中，所述条件包括添加与粘液、上皮细胞或其它细胞结合的细菌的特异性一抗，以及添加可检测地标记的二抗，所述二抗对于与所述细菌结合的所述一抗是特异性的。在一些实施方案中，所述方法包括添加能使与所述一抗结合的所述可检测地标记的二抗可视化的底物。在一些实施方案中，粘液被包被到微量滴定板上。在一些实施方案中，所述可检测地标记的二抗包含酶标记。在一些实施方案中，所述底物是用于在所述酶标记的存在下能提供比色、荧光或化学发光信号的组合物。在一些实施方案中，所述可检测地标记的二抗包含与过氧化物酶偶联的猪抗IgG免疫球蛋白。在一些实施方案中，所述比色组合物是3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。在一些实施方案中，所述细菌是大肠杆菌。所述方法不局限于特定一抗或二抗。在一些实施方案中，一抗的实例包括但不限于特异性针对大肠杆菌O和K抗原血清型的HRP偶联多克隆抗体以及特异性针对大肠杆菌O和K抗原血清型的多克隆抗体。二抗的实例包括但不限于亲和纯化的兔抗山羊IgG-HRP、亲和纯化的兔抗山羊IgG-AP、针对山羊IgG的多克隆FITC偶联抗体(H&L)、来自亲和素链霉菌的链霉亲和素-碱性磷酸酶以及来自亲和素链霉菌的链霉亲和素-过氧化物酶。