[发明专利]粘液、上皮细胞和其它细胞的细菌粘附和抗粘附

权利要求书

1.试剂盒，包含用于测定粘液和/或上皮细胞的细菌粘附和抗粘附的非放射性酶联免疫吸附测定(ELISA)，所述非放射性酶联免疫吸附测定包含：

固相支持体，所述固相支持体上包被了粘液和/或上皮细胞，

包含细菌的样品，

所述细菌的特异性一抗，以及

可检测地标记的二抗，其对于与所述细菌结合的所述一抗是特异性的。

2.如权利要求1所述的试剂盒，还包含能使所述可检测地标记的二抗可视化的底物。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其中所述可检测地标记的二抗包含酶标记。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其中所述底物是在所述酶标记的存在下能提供比色信号、荧光信号或化学发光信号的组合物。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述可检测地标记的二抗包含与过氧化物酶偶联的猪抗IgG免疫球蛋白。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其中所述比色组合物是3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述固相支持体是96孔板。

8.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述细菌是大肠杆菌(E.coli)。

9.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述粘液选自猪近侧回肠粘液、猪远侧结肠粘液、肉鸡十二指肠粘液和肉鸡盲肠粘液。

10.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述一抗是特异性针对大肠杆菌O和K抗原血清型的辣根过氧化物酶(HRP)偶联多克隆抗体。

11.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述一抗是特异性针对大肠杆菌O和K抗原血清型的多克隆抗体。

12.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述二抗是亲和纯化的兔抗山羊IgG-HRP。

13.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述二抗是亲和纯化的兔抗山羊IgG-AP。

14.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述二抗是针对山羊IgG的多克隆FITC偶联抗体。

15.如权利要求1所述的试剂盒，其中二抗是来自亲和素链霉菌(Streptomyces avidinii)的链霉亲和素-碱性磷酸酶。

16.如权利要求1所述的试剂盒，其中二抗是来自亲和素链霉菌的链霉亲和素-过氧化物酶。

17.测定细菌和粘液和/或上皮细胞之间粘附和抗粘附的方法，所述方法包括

a)提供

i)包含细菌的样品和

ii)粘液和/或上皮细胞或其它细胞；以及

b)在非放射性比色测定中、在能测定所述细菌和所述粘液和/或上皮细胞之间的粘附和抗粘附的条件下，使所述包含细菌的样品和所述粘液和/或上皮细胞混合。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述非放射性比色测定是ELISA测定。

19.如权利要求17所述的方法，其中所述条件包括添加与粘液和/或上皮细胞结合的所述细菌的特异性一抗。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述条件包括添加可检测地标记的二抗，所述二抗对于与所述细菌结合的所述一抗是特异性的。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述条件包括添加能使与所述一抗结合的所述可检测地标记的二抗可视化的底物。

22.如权利要求17所述的方法，其中将所述粘液和/或上皮细胞包被到微量滴定板上。

23.如权利要求20所述的方法，其中所述可检测地标记的二抗包含酶标记。

24.如权利要求21所述的方法，其中所述底物是用于在所述酶标记的存在下能提供比色信号、荧光信号或化学发光信号的组合物。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述可检测地标记的二抗包含与过氧化物酶偶联的猪抗IgG免疫球蛋白。

26.如权利要求24所述的方法，其中所述比色组合物是3，3’，5，5’-四甲基联苯胺。

27.如权利要求17所述的方法，其中所述细菌是大肠杆菌。