[发明专利]茎部加速的等温核酸扩增技术

权利要求书

1.一种合成多核酸的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

a)提供包括至少第一和第二交互引物结合区的目标模板；

b)提供包括第一和第二片段的第一引物，其中所述第一片段实质上与所述模板上的第一交互引物结合区互补，并且所述第二片段包括序列，该序列实质上与第一引物中的另一个区域或第一引物的第一片段所生成的扩增子中的一个区域互补，从而使得第二片段能够形成环状物；

c)提供包括第一片段及可选的第二片段的第二引物，其中所述第一片段实质上与所述模板上的第二引物结合区互补，并且所述可选的第二片段包括序列，该序列实质上与第二引物中的另一个区域或第二引物的第一片段所生成的扩增子中的一个区域互补，从而使得第二区域能够形成环状物；

d)提供至少一个引物，其能够与第一和第二交互引物结合区之间的区域结合；

e)提供合成所述多核酸所必须的试剂和条件；

f)执行所述多核酸的合成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：合成过程通过来自以下小组的核酸扩增技术执行：环介导等温扩增、模板重引发扩增、自扩张扩增和智能扩增过程。

3.根据前述权利要求中任何一项所述的方法，其特征在于：正向和/或反向交互引物结合区包括用于两个或多个引物的结合位点。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：结合到所述正向和/或反向交互引物结合区的所述两个或多个引物具有相同类型。

5.根据前述权利要求中任何一项所述的方法，其特征在于：结合到所述正向和/或反向交互引物结合区的所述引物为提供环状物的引物。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述两个或多个引物为用于形成环状物的引物。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：结合到所述正向和/或反向交互引物结合区的所述两个或多个引物具有不同类型。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述两个或多个结合位点都位于所述目标模板和/或扩增子的相同链上。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述两个或多个结合位点都位于所述目标模板和/或扩增子的不同链上。

10.根据前述权利要求中任何一项所述的方法，其特征在于：所述正向和反向交互引物结合位点隔开一定距离，从而使得仅仅在存在茎部引物的情况下才会合成多核酸。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：所述方法用于检测样本中的抗药性金黄色葡萄球菌。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：使用mecA基因和orfX基因检测抗药性金黄色葡萄球菌。

13.根据权利要求1-12中任何一项所述的方法，其特征在于：在步骤(d)中使用了单个茎部引物。

14.根据权利要求1-12中任何一项所述的方法，其特征在于：在步骤(d)中使用了两个或多个茎部引物。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于：在步骤(d)中使用的所述两个或多个茎部引物具有相同种类。

16.根据权利要求14所述的方法，其特征在于：在步骤(d)中使用的所述两个或多个茎部引物具有不同种类。

17.根据权利要求14-16中任何一项所述的方法，其特征在于：在步骤(d)中使用的所述两个或多个茎部引物结合到所述扩增子的交互链上。

18.根据权利要求13-15中任何一项所述的方法，其特征在于：在步骤(d)中使用的所述两个或多个茎部引物结合到所述扩增子的相同链上。

19.根据前述权利要求中任何一项所述的方法，其特征在于：所述茎部引物是简单引物、用于形成环状物的引物、发卡引物或提供环状物的引物。

20.根据前述权利要求中任何一项所述的方法，其特征在于：所述茎部引物包含改性碱基。

21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于：所述改性碱基选自小组：N4-甲基胞嘧啶、肌苷、核糖核苷酸、荧光碱基、光解碱基或通用碱基。