[发明专利]用于生产感兴趣的化合物的经改进的宿主细胞

权利要求书

1.用于生产感兴趣的化合物的重组宿主细胞，所述宿主细胞包含适用于整合一个或多个拷贝的感兴趣的多核苷酸的、至少两个基本同源的DNA结构域，其中所述至少两个基本同源的DNA结构域中的至少一个被改造为与其来源的基本同源的DNA结构域相比对所述感兴趣的多核苷酸具有增强的整合偏好，并且其中所述经改造的基本同源的DNA结构域所来源的基本同源的DNA结构域具有比所述至少两个基本同源的DNA结构域中的另一个高至少10％的基因转变频率。

2.根据权利要求1所述的宿主细胞，其中所述经改造的基本同源的DNA结构域与其它版本的基本同源的DNA结构域通过独特的序列标签区分。

3.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述经改造的基本同源的DNA结构域包含下述靶向DNA结构域，其中所述靶向DNA结构域包含具有增强的整合偏好的序列。

4.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述至少两个基本同源的DNA结构域各自整合了至少一个拷贝的感兴趣的多核苷酸。

5.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，还包括通过操控朝向HR的整合途径而提高的多核苷酸整合进所述宿主细胞基因组中预定位点的靶向整合的效率。

6.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述至少两个基本同源的DNA结构域是glaA基因座或是amyBI或amyBII)基因座。

7.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述感兴趣的多核苷酸是经密码子优化的多核苷酸。

8.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其还包含选自glaA、amyA、amyBI、amyBII、oahA、毒素相关的多核苷酸和prtT的组的多核苷酸，所述多核苷酸包含修饰，其中在可比较的条件下培养时，所述宿主细胞与其来源的亲本细胞相比缺乏由所述包含修饰的多核苷酸编码的产物。

9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其还包含pepA的缺乏。

10.根据权利要求8或9所述的宿主细胞，其还包含SEC61中的修饰。

11.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是没有选择标记物的宿主细胞。

12.根据前述权利要求中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真菌宿主细胞。

13.根据权利要求12所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是丝状真菌宿主细胞。

14.用于生产感兴趣的化合物的重组宿主细胞的生产方法，所述宿主细胞包含适用于整合一个或多个拷贝的感兴趣的多核苷酸的、至少两个基本同源的DNA结构域，所述方法包括改造与另一基本同源的DNA结构域相比具有更高的基因转变频率的基本同源的DNA结构域，使其与其来源的基本同源的DNA结构域相比对所述感兴趣的多核苷酸具有增强的整合偏好，所述改造包括：为具有更高基因转变频率的所述基本同源的DNA结构域提供靶向DNA结构域，其中所述靶向DNA结构域包含具有增强的整合偏好的序列。

15.根据权利要求14所述的方法，其还包括：

a.用感兴趣的多核苷酸转化在权利要求14中获得的所述细胞，

b.选择或筛选向所述基本同源的DNA结构域中整合了至少一个拷贝的感兴趣的多核苷酸的细胞，

c.繁殖在(b)中获得的所述细胞，并选择或筛选在额外拷贝的基本同源的DNA结构域中整合了至少一个拷贝的所述感兴趣的多核苷酸的细胞。

16.根据权利要求15所述的方法，其还包括下述步骤：重复步骤(c)，直至所述基本同源的DNA结构域的各个拷贝整合了至少一个拷贝的所述感兴趣的多核苷酸为止。

17.用于生产感兴趣的化合物的方法，所述方法包括：

a.在有助于生产所述化合物的条件下培养根据权利要求1-13中任一项所述的宿主细胞；和

b.从所述培养基中回收所述感兴趣的化合物。