[发明专利]容易地分离的具有天然免疫球蛋白形式的双特异性抗体

权利要求书

1.异源二聚双特异性抗原结合蛋白，其包含：

a.第一多肽，其从N-末端至C-末端包含：选择性地结合第一表位的第一表位结合区、包含第一CH3区的免疫球蛋白恒定区，该第一CH3区为选自IgG1、IgG2和IgG4的人IgG的CH3区；和

b.第二多肽，其从N-末端至C-末端包含：选择性地结合第二表位的第二表位结合区、包含第二CH3区的免疫球蛋白恒定区，该第二CH3区为选自IgG1、IgG2和IgG4的人IgG的第二CH3区，其中所述第二CH3区包含减少或消除该第二CH3结构域与A蛋白的结合的修饰。

2.权利要求1的双特异性蛋白，其中所述第一多肽和所述第二多肽为人IgG重链。

3.权利要求1的双特异性蛋白，其还包含免疫球蛋白轻链。

4.权利要求3的双特异性蛋白，其中所述免疫球蛋白轻链为人免疫球蛋白轻链。

5.权利要求1的双特异性蛋白，其中所述第一多肽和所述第二多肽中每一个为人IgG1重链。

6.权利要求1的双特异性蛋白，其中所述修饰选自IMGT外显子编号系统中的(a)95R，和(b)95R和96F，或者EU编号系统中的(a’)435R，和(b’)435R和436F。

7.权利要求6的双特异性蛋白，其还包含1至5个选自下列的修饰：IMGT外显子编号系统中的16E、18M、44S、52N、57M和82I，或者EU编号系统中的356E、358M、384S、392N、397M和422I。

8.权利要求6的双特异性蛋白，其中所述双特异性抗体的CH3结构域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。

9.权利要求7的双特异性蛋白，其中所述双特异性抗体的CH3结构域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。

10.制备双特异性抗体的方法，其包括：

a.获得核酸序列，其编码包含识别第一表位的第一可变结构域的第一免疫球蛋白重链，其中所述第一免疫球蛋白重链包含IgG1、IgG2或IgG4同种型恒定结构域；

b.获得第二核酸序列，其编码包含识别第二表位的第二可变结构域的第二免疫球蛋白重链，其中所述第二免疫球蛋白重链包含IgG1、IgG2或IgG4同种型恒定结构域，所述IgG1、IgG2或IgG4同种型恒定结构域在其CH3结构域中包含根除或减少与A蛋白的结合的修饰；

c.获得第三核酸序列，其编码与所述第一和第二免疫球蛋白重链配对的免疫球蛋白轻链；

d.将所述第一、第二和第三核酸序列引入到哺乳动物细胞中；

e.让所述细胞表达双特异性抗体；和

f.基于该双特异性抗体结合A蛋白的能力来分离所述双特异性抗体。

11.权利要求10的方法，其中所述修饰选自IMGT外显子编号系统中的(a)95R，和(b)95R和96F，或者EU编号系统中的(a’)435R，和(b’)435R和436F。

12.权利要求11的方法，其还包括1至5个选自下列的修饰：IMGT外显子编号系统中的16E、18M、44S、52N、57M和82I，或者EU编号系统中的356E、358M、384S、392N、397M和422I。

13.权利要求11的方法，其中所述双特异性抗体的CH3结构域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。

14.权利要求12的方法，其中所述双特异性抗体的CH3结构域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。

15.权利要求10的方法，其中在包含A蛋白的固体支持物上分离所述双特异性抗体。

16.权利要求15的方法，其中所述固体支持物包括A蛋白亲和柱，并且使用pH梯度来分离所述双特异性抗体。

17.权利要求16的方法，其中所述pH梯度为包含一个或多个位于pH 3和pH 5之间的pH阶梯的阶梯式梯度。