[发明专利]基因矫正的无疾病的诱导的多能干细胞的产生

权利要求书

1.制备基因矫正的诱导的多能干细胞的方法，包括：

(i)用编码疾病矫正基因的核酸转染基因患病的非多能细胞，以形成基因矫正的非多能细胞；

(ii)用编码OCT4蛋白的核酸、编码SOX2蛋白的核酸、编码KLF4蛋白的核酸以及编码cMYC蛋白的核酸转染所述基因矫正的非多能细胞，以形成基因矫正的转染的非多能细胞；以及

(iii)允许所述基因矫正的转染的非多能细胞分裂，由此形成所述基因矫正的诱导的多能干细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述基因患病的非多能细胞是人类细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述基因患病的非多能细胞是小鼠细胞。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病矫正基因编码FANCA蛋白。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述疾病矫正基因编码FANCD2蛋白。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括将至少一种激酶抑制剂引入步骤(iii)的所述基因矫正的转染的非多能细胞。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括将MEK1和GSK3激酶抑制剂引入步骤(iii)的所述基因矫正的转染的非多能细胞。

8.制备基因矫正的诱导的多能干细胞的方法，包括：

(i)用编码OCT4蛋白的核酸、编码SOX2蛋白的核酸、编码KLF4蛋白的核酸以及编码cMYC蛋白的核酸转染基因患病的非多能细胞，以形成转染的基因患病的非多能细胞；

(ii)允许所述转染的基因患病的非多能细胞分裂，由此形成基因患病的诱导的多能干细胞；以及

(iii)用编码疾病矫正基因的核酸转染所述基因患病的诱导的多能干细胞，以形成所述基因矫正的诱导的多能干细胞。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述方法还包括将至少一种激酶抑制剂引入步骤(ii)的所述转染的基因患病的非多能细胞。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述方法还包括将MEK1和GSK3激酶抑制剂引入步骤(ii)的所述转染的基因患病的非多能细胞。

11.根据权利要求1或8所述方法制备的基因矫正的诱导的多能干细胞。

12.由基因患病的哺乳动物产生基因矫正的体细胞的方法，包括：

(a)使基因矫正的诱导的多能干细胞与细胞生长因子接触；以及

(b)允许所述基因矫正的诱导的多能干细胞分裂，由此形成所述基因矫正的体细胞。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述基因矫正的诱导的多能干细胞根据包括以下步骤的方法制备：

(i)用编码疾病矫正基因的核酸转染基因患病的非多能细胞，以形成基因矫正的非多能细胞；

(ii)用编码OCT4蛋白的核酸、编码SOX2蛋白的核酸、编码KLF4蛋白的核酸以及编码cMYC蛋白的核酸转染所述基因矫正的非多能细胞，以形成基因矫正的转染的非多能细胞；以及

(iii)允许所述基因矫正的转染的非多能细胞分裂，由此形成所述基因矫正的诱导的多能干细胞。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述方法还包括将激酶抑制剂引入步骤(iii)的所述基因矫正的转染的非多能细胞。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述方法还包括将MEK1和GSK3激酶抑制剂引入步骤(iii)的所述基因矫正的转染的非多能细胞。

16.如权利要求12所述的方法，其中所述基因矫正的诱导的多能干细胞根据包括以下步骤的方法制备：

(i)用编码OCT4蛋白的核酸、编码SOX2蛋白的核酸、编码KLF4蛋白的核酸以及编码cMYC蛋白的核酸转染基因患病的非多能细胞，以形成转染的基因患病的非多能细胞；

(ii)允许所述转染的基因患病的非多能细胞分裂，由此形成基因患病的诱导的多能干细胞；以及

(iii)用编码疾病矫正基因的核酸转染所述基因患病的诱导的多能干细胞，以形成所述基因矫正的诱导的多能干细胞。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述方法还包括将至少一种激酶抑制剂引入步骤(ii)的所述转染的基因患病的非多能细胞。