[发明专利]使用非内源pol I启动子的反向遗传有效
| 申请号： | 201080027545.1 | 申请日： | 2010-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN102597246A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | P·道米策;M·弗兰蒂;P·苏帕菲帕特;P·马森;B·基纳;S·克罗塔 | 申请（专利权）人： | 诺华有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 余颖 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 使用 内源 pol 启动子 反向 遗传 | ||
1.含至少一种编码病毒RNA分子的表达构建体的宿主细胞，其中所述构建体的所述病毒RNA分子的表达由所述宿主细胞分类学目的非内源pol I启动子控制。
2.一种具有至少一种内源pol I启动子和至少一种非内源pol I启动子的细胞，所述细胞内源pol I启动子控制内源rRNA的表达，所述非内源polI启动子控制病毒RNA或其互补物的表达。
3.一种生产重组病毒的方法，所述方法包括将如权利要求1或2所述的细胞在表达所述病毒RNA分子的条件下培养以生产病毒的步骤。
4.一种制备病毒的方法，所述方法包括步骤：(i)如权利要求3所述的方法生产重组病毒；(ii)用获自步骤(i)的病毒感染培养宿主；(iii)培养来自步骤(ii)的宿主以生产更多病毒；和(iv)纯化获自步骤(iii)的病毒。
5.一种制备疫苗的方法，包括步骤(a)用权利要求4所述的方法制备病毒和(b)从所述病毒制备疫苗。
6.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述pol I启动子为灵长类pol I启动子且所述细胞为非灵长类细胞。
7.如权利要求1-5中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述pol I启动子为非犬pol I启动子且所述细胞为犬细胞。
8.如权利要求7所述的细胞或方法，其特征在于，所述pol I启动子为人pol I启动子且所述细胞为犬细胞。
9.如权利要求8所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞是MDCK细胞。
10.如权利要求9所述的细胞或方法，其特征在于，所述MDCK细胞为细胞系MDCK 33016(DSM ACC2219)。
11.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞包括至少一种双向表达构建体。
12.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述表达构建体为表达载体或线性表达构建体。
13.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为分节段病毒。
14.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为非分段病毒。
15.如上述权利要求中任一项所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为负链RNA病毒。
16.如权利要求15所述的细胞或方法，其特征在于，所述病毒为流感病毒。
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