[发明专利]经遗传修饰的微生物的生成方法

权利要求书

1.一种经遗传修饰的酵母细胞，包含：

(a)在至少一个孢子形成基因中的功能性破坏；

(b)在至少一个信息素应答基因中的功能性破坏；和

(c)整合在染色体上的编码目标蛋白的异源核苷酸序列；

其中所述经遗传修饰的酵母细胞具有孢子形成障碍和内源性交配障碍。

2.根据权利要求1所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述经遗传修饰的酵母细胞为异宗配合的(ho)。

3.根据权利要求1所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述经遗传修饰的酵母细胞为二倍体。

4.根据权利要求2所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述经遗传修饰的酵母细胞为二倍体。

5.根据权利要求4所述的经遗传修饰的二倍体酵母细胞，其中所述经遗传修饰的酵母细胞除其交配型等位基因以外是纯合的。

6.根据权利要求1所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述经遗传修饰的酵母细胞为单倍体。

7.根据权利要求2所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述经遗传修饰的酵母细胞为单倍体。

8.根据权利要求7所述的经遗传修饰的单倍体酵母细胞，进一步包含编码功能性的同宗配合(HO)蛋白的重组质粒。

9.根据权利要求8所述的经遗传修饰的单倍体酵母细胞，进一步包含至少一个重组质粒，所述重组质粒编码在所述经遗传修饰的单倍体酵母细胞中被功能性破坏的所述至少一个信息素应答基因的功能性拷贝。

10.根据权利要求1-9任一项所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述经遗传修饰的酵母细胞是酿酒酵母细胞。

11.根据权利要求10所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述酿酒酵母细胞是Baker’s酵母、Mauri、Santa Fe、IZ-1904、TA、BG-1、CR-1、SA-1、M-26、Y-904、PE-2、PE-5、VR-1、BR-1、BR-2、ME-2、VR-2、MA-3、MA-4、CAT-1、CB-1、NR-1、BT-1或AL-1菌株。

12.根据权利要求10所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述酿酒酵母细胞是PE-2菌株。

13.根据权利要求10所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述酿酒酵母细胞是CAT-1菌株。

14.根据权利要求1所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述至少一个孢子形成基因选自下组：IME1、IME2、NDT80、SPO11、SPO20、AMA1、HOP2和SPO21。

15.根据权利要求1所述的经遗传修饰的酵母细胞，所述至少一个信息素应答基因选自下组：STE5、STE4、STE18、STE12、STE7和STE11。

16.根据权利要求14所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述酵母细胞包含IME1基因的功能性破坏。

17.根据权利要求15所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述酵母细胞包含STE5基因的功能性破坏。

18.根据权利要求1所述的经遗传修饰的酵母细胞，其中所述酵母细胞包含IME1基因和STE5基因的功能性破坏。

19.根据权利要求9所述的经遗传修饰的单倍体酵母细胞，其中所述酵母细胞包含STE5基因的功能性破坏和编码功能性STE5蛋白的重组质粒。