[发明专利]轭合方法

权利要求书

1.一种在溶液中制备纯化的轭合物的方法，其中所述轭合物包括与细胞结合剂连接的效应分子或报道分子，所述方法包括以下步骤：(a)使所述效应分子或报道分子与双官能连接体试剂接触以共价连接所述连接体与所述效应分子或报道分子并由此制备包含具有与之连接的连接体的所述效应分子或报道分子的未纯化的第一混合物，(b)通过所述未纯化的第一混合物与细胞结合剂反应而使所述细胞结合剂与具有与之连接的连接体的所述效应分子或报道分子轭合以制备第二混合物，和(c)使所述第二混合物经受正切流动过滤、透析、凝胶过滤、吸附色谱、选择性沉淀或其组合以由此制备纯化的轭合物。

2.权利要求1所述的方法，其中步骤(b)在pH约4至约9的溶液中进行。

3.权利要求1所述的方法，其中步骤(b)的第二混合物基本上不含由于分子内或分子间反应而生成的不期望的交联的、水解的物类。

4.权利要求1所述的方法，其中所述效应分子是细胞毒性剂。

5.权利要求4所述的方法，其中所述细胞毒性剂是美登木素生物碱、紫杉烷、CC1065或其类似物。

6.权利要求4所述的方法，其中所述细胞毒性剂是美登木素生物碱。

7.权利要求6所述的方法，其中所述美登木素生物碱包含硫醇基。

8.权利要求6所述的方法，其中所述美登木素生物碱是DM1。

9.权利要求6所述的方法，其中所述美登木素生物碱是DM4。

10.权利要求1所述的方法，其中所述细胞结合剂是干扰素、白介素2(IL-2)、白介素3(IL-3)、白介素4(IL-4)、白介素6(IL-6)、胰岛素、EGF、TGF-α、FGF、G-CSF、VEGF、MCSF、GM-CSF、运铁蛋白或抗体。

11.权利要求10所述的方法，其中所述细胞结合剂是抗体。

12.权利要求11所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。

13.权利要求11所述的方法，其中所述抗体是人或人源化单克隆抗体。

14.权利要求10所述的方法，其中所述抗体是MY9、抗B4、EpCAM、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD11、CD19、CD20、CD22、CD26、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD56、CD79、CD105、CD138、EphA受体、EphB受体、EGFR、EGFRvIII、HER2、HER3、间皮素、cripto、α_vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₆整联蛋白或C242。

15.权利要求13所述的方法，其中所述人或人源化抗体是My9-6、B4、C242、N901、DS6、EphA2受体、CD38、IGF-IR、CNTO 95、B-B4、曲司珠单抗、帕妥株单抗、比伐珠单抗、西罗珠单抗或利妥昔单抗。

16.权利要求1所述的方法，其中所述连接体是可裂解或不可裂解的连接体。

17.权利要求1所述的方法，其中所述报道分子是放射性同位素。