[发明专利]蛋白质间相互作用的高灵敏度检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测蛋白质间相互作用的方法。

背景技术

最近，利用分裂荧光素酶片段的互补性，人们开发出了检测两个目的蛋白质间相互作用的系统(Kim，S.B.，Ozawa，T.，Watanabe，S.，Umezawa，Y.，2004.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.101，11542-11547)。作为利用互补性来检测蛋白质间相互作用的方法，通常是将分裂的报告蛋白的各片段与目的蛋白融合，但此时，任何片段自身都无法保持有意活性。如果目的蛋白质间发生相互作用，则两个无活性的报告蛋白片段相互互补，使活性恢复，产生用来间接跟踪该蛋白质间相互作用的可读信号。

对于以二氢叶酸还原酶、β-内酰胺酶绿色荧光蛋白为首的各种报告蛋白，一直以来使用利用上述互补性的方法。此外，海肾荧光素酶、萤火虫荧光素酶、发红光叩甲虫(Elateridae)荧光素酶、发绿光叩甲虫荧光素酶等几种荧光素酶也一直以来使用上述方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题

本发明的目的在于提供一种检测灵敏度显著提高的利用分裂荧光素酶的检测系统。

解决技术问题的技术手段

本发明人为了解决上述问题进行了深入研究，发现使用源于巴西产发光叩甲虫(Pyrearinus termitilluminans)的荧光素酶，使具有SEQ ID NO：1的C端侧片段与具有任一SEQ ID NO：2～6的N端片段分别与可相互结合的两个蛋白质融合，在使这两个融合蛋白结合时，会释放出比现有发光强度强约30倍以上的光，从而完成了本发明。

即，本发明的一种实施方式为具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的融合蛋白。此外，另一实施方式为具有选自SEQ ID NO：2～6所示的氨基酸序列的融合蛋白。

并且，在本说明书中，“蛋白质具有氨基酸序列”是指该蛋白质含有该氨基酸序列，其也可以含有除该氨基酸序列以外的氨基酸序列。此外，“融合蛋白”是指源于发光叩甲虫荧光素酶的肽(在本发明中，具体是指由选自SEQ ID NO：1～6所示的氨基酸序列组成的肽)与非源于发光叩甲虫荧光素酶的肽相融合的蛋白质。

此外，另一实施方式为具有由SEQ ID NO：1所示氨基酸序列所组成的肽的融合蛋白与具有由选自SEQ ID NO：2～6所示氨基酸序列所组成的肽的融合蛋白的复合物。

此外，另一实施方式为编码由选自SEQ ID NO：2～6所示氨基酸序列所组成的肽的DNA。并且，还可以是含有该DNA的表达载体，其能够表达融合到由选自SEQ ID NO：1～6所示的氨基酸序列组成的肽中的融合蛋白。

并且，另一实施方式为检测蛋白质间相互作用的试剂盒，其包括表达具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列所组成的肽的蛋白质的表达载体以及表达具有选自SEQ ID NO：2～6所示氨基酸序列所组成的肽的蛋白质的表达载体。

并且，另一实施方式为检测具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的融合蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：使该融合蛋白与结合融合蛋白相互作用，形成复合物的步骤，所述结合融合蛋白具有选自SEQ ID NO：2～6所示的氨基酸序列且可与该融合蛋白结合；以及检测从所述复合物中释放出的光的步骤。

此外，另一实施方式为检测具有选自SEQ ID NO：2～6所示氨基酸序列的融合蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：使该融合蛋白与结合融合蛋白相互作用，形成复合物的步骤，所述结合融合蛋白具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列且可与该蛋白质结合；以及检测从所述复合物中释放出的光的步骤。

此外，另一实施方式为复合物的检测方法，所述复合物为第一融合蛋白与结合融合蛋白的复合物，所述第一融合蛋白具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；所述结合融合蛋白具有选自SEQ ID NO：2～6所示的氨基酸序列且可与第一蛋白质结合，其特征在于，该方法包括检测从所述复合物释放出的光的步骤。