[发明专利]免疫测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种使利用蛋白A结合在基板表面的免疫球蛋白G从所述表面解离的方法。

背景技术

蛋白A是在金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁成分构成中占5％比重的蛋白质，简写为“SpA”。蛋白A对免疫球蛋白G具有高亲合性。蛋白A夹在基板的表面和该免疫球蛋白G之间，并将免疫球蛋白G固定在该基板的表面上。专利文献1的第3页右下第3行～第4行公开了免疫球蛋白G结合于蛋白A，但通过降低pH使免疫球蛋白G从蛋白A解离的技术。利用这种pH降低导致的解离，可以检测或定量生体试样中含有的目的物质。

pH的降低可对生体试样产生不期望的变性效果。并且，为了使pH降低，也需增加处理步骤的数目。

本发明人们发现，在经由蛋白A结合了由保藏编号FERM BP-10459号生成细胞株生成的抗人白蛋白单克隆抗体(2F13F11G11)所构成的免疫球蛋白IgG抗体的表面上供给含有人血清球蛋白的生体材料时，即使该生体材料的pH为6以上、优选为7.4以上，该免疫球蛋白IgG抗体也可从蛋白A解离。

【专利文献1】：日本特开平02-073158号公报

发明内容

本发明提供一种使经由蛋白A结合在基板表面的免疫球蛋白G(IgG)抗体从上述表面解离的方法。这种方法包括以下步骤。即，(A)制备具有经由蛋白A结合了免疫球蛋白G抗体的表面的基板的步骤，以及(B)将含有人血清白蛋白的溶液提供至上述表面，从而使上述免疫球蛋白G抗体从上述蛋白A解离的步骤。这里，免疫球蛋白G抗体为由保藏编号FERM BP-10459号生成细胞株所生成的抗人白蛋白单克隆抗体(2F13F11G11)，上述溶液具有6以上8.9以下的pH。

本说明书中使用的术语中，术语“蛋白A”是指，也称之为“SpA”的蛋白质。这一蛋白质是从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁成分中发现的。本领域技术人员可通过市售供给渠道而获得天然或合成的蛋白A。

在一种实施方式中，在上述步骤(B)中，通过抗原抗体反应可形成上述免疫球蛋白G抗体与上述人血清白蛋白的复合物。

本说明书中使用的术语中，术语“复合物”是指，2个以上的分子通过相互作用结合，且在其整体上形成如1个分子状地行使功能的状态的一组分子。例如，多肽、多聚核酸、脂质、糖、低分子等多个分子相互作用并结合，并可形成如1个分子状地行使功能的状态的一组分子。在本说明书的上述例子中，上述免疫球蛋白G抗体与人血清白蛋白分子通过相互作用而结合，并形成如1个分子状地行使功能的状态的一组分子。

本说明书中使用的术语中，术语“相互作用”是指，针对2个物质(的分子)而言，其含义可涵盖一方的物质与另一方的物质之间的作用力(例如，分子间作用力(范德华力)、氢键、疏水性相互作用等)。通常，相互作用后的2个物质处于会合或结合的状态。

本说明书中使用的术语中，术语“结合”是指，在2个蛋白质或化合物或相关的蛋白质或化合物之间、或它们的组合之间的物理相互作用或化学相互作用。这种结合包括离子键结合、非离子键结合、氢键结合、范德华结合、疏水性相互作用等。物理相互作用(结合)可以是直接性或间接性结合，间接性结合或借助或起因于其他蛋白质或化合物的性能效果。直接性结合是指，即便借助或起因于其他蛋白质或化合物的性能效果也不会产生、且不伴随其他实质性化学中间体的相互作用。

在另一种实施方式中，上述复合物形成时，上述免疫球蛋白G抗体可从上述表面解离。

此外，上述免疫球蛋白G抗体从上述表面解离后，在其解离时存在的复合物无需一定要稳定存在，在解离的同时即便其复合物间的结合解开，也可在后续的步骤中构建适宜必要的测定体系。

在另一种实施方式中，在上述步骤(B)之后，上述溶液中可含有从上述表面解离的上述免疫球蛋白G抗体。

再者，在另一种实施方式中，在上述步骤(B)之后，上述溶液中可含有上述复合物。

再者，在另一种实施方式中，上述pH为7.4以上8.9以下。

再者，在另一种实施方式中，上述溶液可以是缓冲液。更优选为，上述pH为7.4以上8.9以下。