[发明专利]具有减少的金属肽酶表达、适于重组多肽产生的突变细胞

权利要求书

1.一种突变的细菌细胞，所述细胞产生至少一种目标异源多肽，其中所述细胞与其他为同基因的但非突变的细胞相比，具有减少的包含与SEQ ID NO：2中所示序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的表达水平。

2.权利要求1的细胞，其为原核细胞，优选革兰氏阳性细胞。

3.权利要求2的细胞，其为芽孢杆菌属细胞。

4.权利要求3的细胞，其为嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenifprmis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。

5.权利要求1-4任一项的细胞，其中所述包含与SEQ ID NO：2中所示序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽是金属肽酶。

6.权利要求1-5任一项的细胞，其在编码包含与SEQ ID NO：2中所示序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的基因中有突变。

7.权利要求6的细胞，其中所述基因包含与SEQ ID NO：1中所示序列至少70％相同的核苷酸序列的多核苷酸。

8.权利要求1-7任一项的细胞，其在至少一个多核苷酸中有突变，其中所述至少一个多核苷酸的具有至少100bp大小的亚序列在中等严格杂交条件下与具有SEQ ID NO：1中所示的序列的多核苷酸或其相应互补序列杂交。

9.权利要求6-8任一项的细胞，其中所述基因部分或完全从染色体缺失，或包含至少一个移码突变或至少一个无义突变。

10.权利要求1-9任一项的细胞，与其他为同基因但非突变的细胞相比，不具有包含与SEQ ID NO：2中所示序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的可测量的表达。

11.权利要求1-10任一项的细胞，其中所述至少一种异源多肽包含酶。

12.权利要求11的细胞，其中所述酶是裂合酶、连接酶、水解酶、氧化还原酶、转移酶或异构酶。

13.权利要求1-12任一项的细胞，其与其他为同基因但非突变的细胞相比，具有目标异源多肽的改善的产生。

14.一种用于构建突变的细菌细胞的方法，所述方法包括下述步骤：

a)使细菌细胞突变；和

b)选择突变细胞，其与其他为同基因但非突变的细胞相比，具有减少的包含与SEQ ID NO：2中所示序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的表达水平。

15.权利要求14的方法，其中所述细胞为原核细胞，优选革兰氏阳性细胞。

16.权利要求15的方法，其中所述细胞为芽孢杆菌属细胞。

17.权利要求16的方法，其中所述细胞为嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或苏云金芽孢杆菌细胞。

18.权利要求14-17任一项的方法，其中所述包含与SEQ ID NO：2中所示序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽是金属肽酶。

19.权利要求14-18任一项的方法，其中步骤(a)中的细胞在编码包含与SEQ ID NO：2中所示序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的基因中有突变。