[发明专利]地加瑞克的制造方法

说明书

发明领域

本发明涉及合成肽的制造方法，特别涉及十肽地加瑞克(degarelix)的制造方法。

发明背景

有很多已知方法可以进行肽合成。一种典型的方法是液相肽合成(LPPS)，该方法是大量生产肽的优选方法。另一种现在常用的多肽合成方法是固相肽合成(SPPS)，其中，生长中的肽链与固体支持物上的树脂共价结合，直至达到所需的长度和序列后再切下。这些方法中，为了防止除了生长中的肽所需的新肽键形成以外的其它反应发生，需要对所掺入氨基酸的反应性侧链进行保护。另外，为了防止所添加的氨基酸之间的副反应以及各步骤中掺入多种氨基酸，所添加的氨基酸通常经α-氨基保护。因此，合成成为固相结合的肽的α-氨基脱保护，然后偶联于一个经α-氨基保护的氨基酸单元的一个反复循环。

地加瑞克是一种GnRH拮抗剂，用于治疗前列腺癌。地加瑞克可迅速起效，抑制促性腺素、睾酮和前列腺特异性抗原(PSA)。地加瑞克是一种以式Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser-4Aph(Hor)-D-4Aph(Cbm)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH₂表示的合成十肽。

地加瑞克中自氨基末端起的第五个氨基酸部分是非天然氨基酸Aph(L-hor)。Aph(L-hor)表示(L-氢化乳清酸)-4-氨基-苯丙氨酸。本领域众所周知(Koedjikov，A.H.等，J.Chem.Soc.Perkin，Trans.2，1984，1077-1081页；Kaneti，J.等，Org.Biomol.Chem.，2004，1098-1103页)，在碱性条件下，包含二氢尿嘧啶部分的化合物会发生重排而成为包含乙内酰脲部分的化合物。Aph(L-Hor)的相应的重排如下所示(左上：二氢尿嘧啶部分N-4-(L-氢化乳清酸氨基)-苯丙氨酸I，R＝-CH₂CHNH₂COOH；右下：乙内酰脲部分II，N-4-[2-(5-乙内酰脲基)-乙酰基)-苯丙氨酸)。

在重排中，二氢尿嘧啶部分I转化为乙内酰脲部分II。4Aph(L-Hor)的L-Hor部分为二氢尿嘧啶类型时，希望在采用碱性条件的地加瑞克制造过程中发生此类重排。申请人通过下述方法证明了上述结果，即，使包含α-氨基被Fmoc保护的末端4Aph(Hor)的肽合成中间体与NaOH或有机碱二环己基胺(DCHA)接触。发现所得的脱保护产物被最多数重量％的相应乙内酰脲重排产物污染。由此可以预见，在地加瑞克的合成过程中，中间体Fmoc-4Aph(Hor)-4Aph(Cbm)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH-树脂在碱性条件下脱保护的过程中发生部分重排而成为Fmoc-X-4Aph(Cbm)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH-树脂，X为4-([2-(5-乙内酰脲基)]-乙酰基氨基)-苯丙氨酸。因此可以预见，由Fmoc-4Aph(Hor)-4Aph(Cbm)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH-树脂得到的地加瑞克产物被相应量的Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser-X-D-4Aph(Cbm)-Leu-ILys-Pro-D-Ala-NH₂污染。地加瑞克是给予人类的药物的活性成分。因此其不能被任何含量超过产品的0.3重量％的杂质污染。因此，适合人类使用的地加瑞克中，乙内酰脲副产物的量不允许多于0.3重量％。因为包含乙内酰脲部分的副产物在结构上与地加瑞克非常相似，因此难以将它们分离。如果进行尝试，则可以预见分离会导致产品的显著损失。因此，在采用保护基Fmoc的药物级地加瑞克的制造工艺中，应当避免碱性条件。

地加瑞克的合成在US 5925730A中揭示。该合成中优选的α-氨基保护基是叔丁氧基羰基(Boc)，该基团被用于所有实施例。而且，出于该目的，还揭示了多种其它众所周知的保护基，例如芴甲氧羰基(Fmoc)。Boc基团的优点在于，被其保护的α-氨基可在酸性条件下通过三氟乙酸(TFA)的标准处理解封闭。TFA的缺点在于，其对人类的毒性高，这使得制造人员处于危险之中。TFA的另一缺点在于，其对环境具有毒性，这导致其处置成本高，一旦处置不当就会污染环境。

发明目的

本发明的一个目的是提供一种地加瑞克的制造方法，该方法不会对人类的健康造成危险，尤其是对人类健康的有害程度低于US 5925730A中揭示的方法。

本发明的另一个目的是提供一种地加瑞克的制造方法，该方法不会对环境造成危险，尤其是对环境的有害程度低于US 5925730A中揭示的方法。