[发明专利]具有蛋白酶识别序列的标签肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及具有蛋白酶识别序列的标签肽及其应用，具体而言，涉及具有蛋白酶识别序列的标签肽、编码该标签肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的重组载体、针对该标签肽的抗体、以及使用该抗体的蛋白纯化方法。

背景技术

生命科学领域中，在基础研究、应用研究及产品开发的所有领域中均广泛进行着利用基因重组技术的蛋白的生产。并且，为了检测和纯化利用大肠杆菌或动物细胞表达的重组蛋白，通常在目标蛋白的末端附加由数个残基的肽构成的标签。但是，认为该标签会对目标蛋白的生物活性、结晶结构等产生影响，因此最终必须将其切除。因此，需要预先在标签和目标蛋白之间插入特异性的蛋白酶识别序列。

例如，在非专利文献1中记载了将组氨酸标签和MBP(麦芽糖结合蛋白)标签组合、并且进一步附加有烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus，以下称为“TEV”)蛋白酶识别序列的复合标签。另外，在非专利文献2中记载了组合有蛋白A、钙调蛋白结合肽(CBP)和TEV蛋白酶识别序列的复合标签。但是，上述文献中记载的TEV蛋白酶识别序列，均只不过是为了将附加的标签切去而使用的，并非作为用于TEV蛋白酶识别序列自身的检测和纯化的标签而使用。如果蛋白酶识别序列本身能够作为检测和纯化用的标签使用，则能够飞跃性地简化构建体的设计。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：David S.Waugh，Making the most of affinity tags.TRENDS in Biotechnology Vol.23No.6 June 316-320(2005)

非专利文献2：Oscar Puig，et al.，The Tandem Affinity Purification(TAP)Method：A General Procedure of Protein Complex Purification.METHODS 24，218-229(2001)

发明内容

本发明的目的在于提供能够用于蛋白酶识别序列本身的检测和纯化的标签肽，并且提供利用该标签肽和针对该标签肽的抗体的重组蛋白的纯化方法。此外，本发明的目的还在于提供由该标签肽和第二标签肽组合而成、能够同时结合两种抗体的标签肽。

为了解决上述课题，本发明包含以下的发明。

[1]一种标签肽，具有蛋白酶识别序列，其特征在于，该蛋白酶识别序列与针对该标签肽的抗体的表位重叠。

[2]一种标签肽，具有蛋白酶识别序列，其特征在于，该蛋白酶识别序列与针对该标签肽的抗体的表位重叠，该蛋白酶识别序列为烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶识别序列。

[3]如上述[1]或[2]所述的标签肽，其特征在于，具有以下的氨基酸序列(1)：

(1)RX₁X₂LYX₃QGKDG(序列号1)

(X₁、X₂和X₃相同或不同，表示任意的氨基酸残基)。

[4]如上述[3]所述的标签肽，其中，氨基酸序列(1)为以下的氨基酸序列(2)：

(2)RENLYFQGKDG(序列号2)。

[5]一种标签肽，其特征在于，由上述[1]～[4]中任一项所述的标签肽和第二标签肽组合而成。

[6]如上述[5]所述的标签肽，其特征在于，能够同时结合针对上述[1]～[4]中任一项所述的标签肽的抗体和针对第二标签肽的抗体。

[7]一种多核苷酸，其特征在于，编码上述[1]～[6]中任一项所述的标签肽。

[8]一种重组载体，其特征在于，含有上述[7]所述的多核苷酸。

[9]针对上述[1]～[4]中任一项所述的标签肽的抗体。

[10]如上述[8]所述的抗体，其为由大鼠-小鼠杂交瘤2H5(FERM BP-11245)产生的单克隆抗体。

[11]大鼠-小鼠杂交瘤2H5(FERM BP-11245)。

[12]一种蛋白的纯化方法，其中，包括下述(i)～(iii)的步骤：

(i)使上述[9]或[10]所述的抗体与含有上述[1]～[4]中任一项所述的标签肽和目标蛋白的融合蛋白的试样作用而形成融合蛋白与抗体的结合物的步骤；

(ii)使洗脱物质与上述(i)的步骤中得到的结合物作用而使融合蛋白从抗体中游离的步骤；