[发明专利]筛选胰岛素分泌增强剂的方法

权利要求书

1.一种编码荧光标记的Epac2的DNA，包含编码发出波长彼此不同的荧光的两种不同荧光蛋白的两种不同DNA和编码Epac2的DNA，这些DNA同框融合。

2.如权利要求1所述的DNA，其特征在于，所述两种不同荧光蛋白是青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白。

3.如权利要求2所述的DNA，其特征在于，编码所述青色荧光蛋白的DNA和编码所述黄色荧光蛋白的DNA分别与编码Epac2的DNA的5′-和3′-末端融合。

4.如权利要求2或3所述的DNA，其特征在于，所述青色荧光蛋白是ECFP且所述黄色荧光蛋白是EYFP。

5.一种表达载体，其特征在于，所述载体包含如权利要求1-4所述的掺入DNA。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体用于哺乳动物细胞。

7.一种细胞，其特征在于，所述细胞是携带有如权利要求5或6所述的表达载体的转化体。

8.如权利要求7所述的细胞，其特征在于，所述细胞是哺乳细胞。

9.如权利要求8所述的细胞，其特征在于，所述细胞不表达SUR1基因。

10.如权利要求9所述的细胞，其特征在于，所述细胞是COS细胞。

11.一种荧光标记的Epac2，其是融合蛋白，包含Epac2和与之融合的两种不同的荧光蛋白，其中，所述两种不同的荧光蛋白发出彼此波长不同的荧光。

12.一种荧光标记的Epac2，其是融合蛋白，包含两种不同的的荧光蛋白和Epac2，其中，所述融合蛋白在如权利要求7-10中任一所述的细胞内表达。

13.一种筛选胰岛素分泌增强剂的方法，所述方法包括以下步骤：提供胰岛素分泌增强剂的候选化合物，使各候选化合物与如权利要求7-10之一所述的细胞接触，在所述候选化合物与所述细胞接触前后用所述两种不同荧光蛋白中的短波长荧光蛋白的激发光照射所述细胞以测量所述细胞中包含在荧光标记的Epac2内的所述两种不同荧光蛋白各自发出的荧光强度，检测所述候选化合物与所述细胞接触前后的所述两种不同荧光之间强度比率的变化，和筛选引起变化的候选化合物作为胰岛素分泌增强剂。

14.一种筛选胰岛素分泌增强剂的方法，所述方法包括以下步骤：提供胰岛素分泌增强剂的候选化合物，使各候选化合物与如权利要求11或12所述的荧光标记Epac2接触，在所述候选化合物与所述Epac2接触前后用所述两种不同荧光蛋白中的短波长荧光蛋白的激发光照射所述Epac2以测量包含在所述荧光标记Epac2内的所述两种不同荧光蛋白各自发出的荧光强度，检测与所述候选化合物接触前后的所述两种不同荧光之间强度比率的变化，和筛选引起变化的候选化合物作为胰岛素分泌增强剂。