[发明专利]扩增富含GC的DNA模板的方法

权利要求书

1.提高一种或多种DNA聚合酶在至少一种富含GC的DNA模板上的持续合成能力的方法，该方法包括，在含有GC/AT比率大于1的dNTP的水溶液中进行DNA扩增。

2.权利要求1的方法，其中所述GC/AT比率是1.1-25。

3.权利要求1的方法，其中所述GC/AT比率是2.5-10。

4.权利要求1的方法，其中所述富含GC的DNA模板具有至少65％的GC丰度。

5.权利要求1的方法，其中所述富含GC的DNA模板具有至少90％的GC丰度。

6.权利要求1的方法，其中所述富含GC的DNA模板包含由G和C残基组成的二、三、或四核苷酸的至少五个连续重复。

7.权利要求1的方法，其中所述富含GC的DNA模板至少包含FMR1的5’UTR的一部分。

8.权利要求1的方法，其中所述富含GC的DNA模板包含FMR1的5’UTR的CGG重复。

9.权利要求1的方法，其中所述富含GC的DNA模板至少包含FMR2的5’UTR的一部分。

10.权利要求1的方法，其中所述富含GC的DNA模板包含FMR2的5’UTR的CGG重复。

11.权利要求1的方法，其中所述水溶液进一步包含至少一种增强剂。

12.权利要求11的方法，其中所述至少一种增强剂包含甜菜碱、甜菜碱类似物、DMSO、或中性去污剂之至少一种。

13.权利要求11的方法，其中所述至少一种增强剂包含

a.甜菜碱或甜菜碱类似物；和

b.至少一种选自下组的化合物：DMSO、中性去污剂、和7-脱氮-GTP。

14.权利要求1的方法，包括在水溶液中扩增所述富含GC的模板，所述水溶液包含

a.至少一种富含GC的DNA模板；

b.至少一种镁盐；

c.至少一种DNA聚合酶；

d.至少一种缓冲液；和

e.GC/AT比率大于1的dNTP，

并使所述溶液经历至少一个温育期，该期间发生扩增。

15.权利要求14的方法，其中所述水溶液进一步包含至少一种增强剂。

16.权利要求15的方法，其中所述至少一种增强剂包含甜菜碱、甜菜碱类似物、7-脱氮-GTP、DMSO、和中性去污剂之至少一种。

17.权利要求1的方法，其中通过选自SDA、NASBA、LAMP、RCA、或LCR之至少一种的方法来扩增所述至少一种富含GC的模板。

18.权利要求1的方法，进一步包括提供与所述至少一种富含GC的模板退火的至少一种引物。

19.提高一种或多种DNA聚合酶在至少一种富含GC的DNA模板上的持续合成能力的方法，该方法包括，在水溶液中经PCR扩增所述模板，所述水溶液包含：

a.GC/AT比率为2-10的dNTP；

b.至少一种增强剂，选自甜菜碱、DMSO、和中性去污剂；

c.至少一种DNA聚合酶；

d.1.5-2mM的总镁浓度；和

e.0.7-0.9mM的总dNTP浓度；

其中所述至少一种富含GC的模板包含FMR1的5’UTR的CGG重复。

20.权利要求19的方法，其中所述中性去污剂包含TWEEN-20。

21.权利要求19的方法，其中所述PCR生成包含至少200个CGG重复的产物。

22.权利要求19的方法，其中所述PCR生成包含至少300个CGG重复的产物。

23.一种检测与富含GC的三核苷酸重复病症有关的基因型的方法，包括对至少一种与富含GC的重复有关的基因型进行DNA扩增反应，其中通过提供包含GC/AT比率大于1的dNTP的水溶液来提高一种或多种DNA聚合酶的持续合成能力。