[发明专利]用于检测和鉴定超广谱β-内酰胺酶的方法

权利要求书

1.用于检测和或鉴定样本中具有CTX-M超广谱β-内酰胺酶的微生物存在的方法，其包括：

从待分析CTX-M基因的存在的样本中获得样品；

在标准PCR条件下，将所述样品与扩增引物集接触，其中，所述扩增引物集包含至少一对引物对，其中，所述引物集包含一个以上的具有通用碱基的引物，其中，所述引物对与位于CTX-M超广谱β-内酰胺酶基因内的靶序列侧翼的核酸杂交，并且其中，所述引物对产生靶扩增产物；

提供用于引物延伸的试剂和条件，以产生靶扩增产物；以及

确定靶扩增产物的存在和/或量，其中，所述靶扩增产物的存在说明所述CTX-M基因的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括将所述样品与至少一种与所述靶扩增产物杂交的探针进行接触。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增引物集包含多个扩增引物对，其中，在至少两个CTX-M基因的核酸的存在下，所述多个扩增引物对共同地与所述至少两个CTX-M基因的核酸杂交，并制备靶扩增产物，所述至少两个CTX-M基因来自于至少两个CTX-M组，所述至少两个CTX-M组选自于由CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9和CTX-M-25所组成的组中。

4.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述CTX-M基因的核酸的存在下，所述多个扩增引物对共同地与所述CTX-M基因的核酸杂交，并制备靶扩增产物，所述CTX-M基因来自于CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9和CTX-M-25的组。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增引物集包含多个扩增引物对，其中，在CTX-M异构体1～82的存在下，所述多个扩增引物对共同地与所述CTX-M异构体1～82杂交，并制备靶扩增产物。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增引物集包含多个扩增引物对，其中，在来自于表1列出的每个菌株的CTX-M核酸的存在下，所述多个扩增引物对共同地与所述来自于表1列出的每个菌株的CTX-M核酸杂交，并制备靶扩增产物。

7.根据权利要求2所述的方法，其中，所述探针选自于由分子信标探针、TAQMAN^TM荧光探针和蝎型荧光探针所组成的组中。

8.根据权利要求5所述的方法，进一步包括在标准PCR条件下将所述样品与至少一种与所述靶扩增产物杂交的探针接触，所述靶扩增产物来自于至少两个CTX-M组靶扩增产物。

9.根据权利要求5所述的方法，进一步包括在标准PCR条件下将所述样品与一种以上的探针接触，其中，所述一种以上的探针共同地与来自于CTX-M组CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9和CTX-M-25的靶扩增产物杂交。

10.根据权利要求5所述的方法，进一步包括在标准PCR条件下将所述样品与至少一种以上的探针接触，其中，所述一种以上的探针共同地与来自于CTX-M组CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、和CTX-M-25的靶扩增产物杂交。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增引物集包含至少两个引物，其中，每个引物包含选自于由下列序列组成的组中的至少12个保守核苷酸：

CYGCTTCCTGGGTTGTGG(SEQ ID NO：1)；

TTGRGGCTGGGTGAAGTAAG(SEQ ID NO：2)；

GGTMTGCCGAAATSWTGG(SEQ ID NO：3)；

CGCAGCCAGAAHATCCCGAC(SEQ ID NO：4)；

TGTRTGCSCAGGCGAACG(SEQ ID NO：6)；

GTAGAGCGTCTGTGYGTTATCG(SEQ ID NO：7)；

TTTATGCGCAGACGAGTG(SEQ ID NO：8)；

AAAGCACCTGCGTATTATCT(SEQ ID NO：9)；

或它们的互补序列。