[发明专利]PKN3/RhoC大分子复合体及其使用方法

说明书

背景技术

本发明涉及使用蛋白激酶N3(PKN3)和RhoC来筛选具有抗癌活性的化合物和诊断患有进展性癌症的患者。

开发有效的癌症治疗方法越来越依赖于对疾病的潜在分子机制的认识以及鉴定到这些机制中可用于研发新药的靶分子。一旦获得此类靶分子，便能够针对这些靶分子来测试候选化合物。在许多情况中，此类药物候选物是由合成的或天然的化合物所组成的化合物文库的成员。

十分需要鉴定到与高度进展形式的癌症相关的新的靶分子，以便能够鉴定并验证新的治疗性化合物和方案。

发明内容

在第一方面，本发明提供鉴定可用于治疗癌症的化合物的方法。所述方法的步骤包括：将测试化合物与蛋白激酶N3(PKN3)多肽(或其片段)、RhoC多肽(或其片段)和磷酸肌醇依赖型激酶-1(PDK1)多肽(或其片段)混合，然后确定所形成的含有PKN3和RhoC的复合体(“complex”)的量，这称为所述复合体的“测试水平”。然后将所述测试水平与参照相比较。所述测试水平与参照之间的任何差异代表所述测试化合物可能具有癌症治疗活性。在一些实施方式中，PKN3、RhoC和PDK1多肽(或它们的片段)在与所述测试化合物混合之前先进行一定程度的纯化。

在一些实施方式中，一或多种所述组份(所述组份为PKN3、RhoC和PDK1，或其相应的片段)含有分子标签，所述标签用于鉴定所述组份并有助于分离所述组份以及与之连接的任何其他组份。分子标签通常是本领域已知的。实例包括多组氨酸、GST和FLAG。在一些实施方式中，PKN3多肽包含分子标签，并通过其分子标签捕获(pull down)PKN3多肽而分离所述复合体。

在一些实施方式中，参照是在缺乏所述测试化合物的情况下所形成的复合体的水平。在其他实施方式中，参照是当所述测试化合物与PKN3、RhoC和PDK1(或它们的相应的片段)混合时所形成的复合体的水平，其中所述激酶的任一或两者无激酶活性(kinase-dead)。

在一些实施方式中，所述测试水平低于参照。在一些实施方式中，所述测试化合物是降低癌细胞的侵袭性或降低肿瘤生长速度的化合物。

在第二方面，本发明提供基于细胞的鉴定可用于治疗癌症的化合物的方法。所述方法的步骤包括：将细胞与测试化合物接触，然后确定在存在所述测试化合物的情况下所述细胞中形成的复合体的量(测试水平)。所述细胞含有PKN3多肽(或其片段)、RhoC多肽(或其片段)和磷酸肌醇依赖型激酶-1(PDK1)多肽，而所述复合体也含有每一所述组份。然后将所述测试水平与参照相比较。所述测试水平与所述参照之间的任何差异代表所述测试化合物可能具有癌症治疗活性。

在一些实施方式中，所述细胞是干细胞，例如长期造血干细胞(LT-HSC)。在其他实施方式中，所述细胞是来自肿瘤的培养细胞。在一些实施方式中，所述细胞具有高的转移能力。在一些实施方式中，所述细胞例如是以下细胞中的一种：PC3细胞、HEK293细胞、MDA-MB231细胞、MCF7细胞、MDA361细胞、MCF468细胞、BT549细胞和HeLa细胞。在其他实施方式中，所述细胞含有作为异源重组多肽的所述组份的一种或多种或全部。

在一些实施方式中，一或多种所述组份(所述组份是PKN3、RhoC和PDK1或其片段)对于所述细胞而言是内源的。在一些实施方式中，一或多种所述组份是重组的并含有分子标签，所述标签用于鉴定所述组份并有助于分离所述组份以及与之连接的任何其他组份。分子标签通常是本领域已知的。实例包括多组氨酸、GST和FLAG。在一些实施方式中，PKN3多肽包含分子标签，并通过其分子标签捕获PKN3多肽而分离所述复合体。

在一些实施方式中，参照是在缺乏所述测试化合物的情况下所形成的复合体的水平。在其他实施方式中，参照是当所述测试化合物与PKN3、RhoC和PDK1(或它们的相应的片段)混合时所形成的复合体的水平，其中所述激酶的任一或两者无激酶活性。

在一些实施方式中，所述测试水平低于参照。在一些实施方式中，所述测试化合物是降低癌细胞的侵袭性或降低原发肿瘤生长速度的化合物。