[发明专利]类胡萝卜素类的定量方法

说明书

技术领域

本发明涉及类胡萝卜素类的定量方法，更加详细地说，涉及对柑橘类果实、含有果汁的饮料等中含有的类胡萝卜素类进行定量的方法。

背景技术

类胡萝卜素是广泛分布于动植物界的色素，被分类为以异戊间二烯C₅H₈为结构单元的四萜(C₄₀)。作为类胡萝卜素类，例如可例举α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、番茄红素、隐黄素、叶黄素、玉米黄素、角黄素、褐藻素、百合黄素、紫黄素等。在类胡萝卜素类中含有在动物体内可转换为维生素A的物质(维生素A原)，并且还知道具有高的抗氧化作用的物质。

已经证明：在这些类胡萝卜素类中，温州蜜桔、瓦伦西亚橙等柑橘类果实、枇杷、柿子、桃子、红柿子椒、番木瓜等中含有的β-隐黄素不仅具有作为维生素A原的特性，而且还具有高的抗致癌作用、高的抗氧化作用，所以近年来已受到关注。

β-隐黄素

β-隐黄素为在光、热的作用下容易发生异构化(顺异构化)，而且通过氧化使聚烯发生断裂等容易受光、热、氧气影响的物质，所以讨论对果汁等中含有的β-隐黄素量进行简便且准确的测定的方法的例子还很少。

在非专利文献1中记载了温州蜜桔汁中的β-隐黄素的定量法。非专利文献1中记载的方法，详细地说，首先在果汁10g中加入1g硅藻土和10ml的乙醇后进行搅拌，注入到铺有薄薄的硅藻土的玻璃过滤器上，用乙醇洗涤提取至残渣的着色变无为止。接着将得到的乙醇提取液(约60ml)在分液漏斗中洗涤并转移，加入相同量的乙醚和蒸馏水，将气层置换为氮气后进行振荡使类胡萝卜素分配到乙醚中。将该乙醚溶液在减压下进行浓缩，加入等量的10％KOH甲醇溶液后在20℃下、在暗处、在氮气气氛下放置1小时进行皂化处理。用乙醚从皂化处理过的溶液中分离出非皂化物，用蒸馏水洗涤直至除去碱为止。接着用无水硫酸钠脱水，在氮气气氛下将溶剂减压留出后，加入流动相溶剂并定容至10ml，将用0.45μm的膜过滤器过滤后的溶液用装有C₃₀分析色谱柱的HPLC装置进行分析。利用使用β-隐黄素标准品而同样制备的试样制作标准曲线，对果汁中的β-隐黄素量进行定量。

现有技术文献

非专利文献1隅田孝司等4人“利用C₃₀色谱柱的温州蜜桔汁中的β-隐黄素定量法”、日本食品科学工学会志(日语原名：隅田孝司、他4名、「C30カラムによる温州ミカン果汁中のβ-クリプトキサンチン定量法」、日本食品科学工学会誌)、1999年7月、第46卷、第7号、p.467-472

非专利文献1中记载的方法为对开始精确称量的温州蜜桔汁中含有的β-隐黄素的总量进行测定的方法，例如在从某一容器向另一容器转移样品时等情况下，如在原来的容器上有残留量则成为产生误差的原因。此时，通常要重复洗涤数次等，以期回收β-隐黄素的全部量，但其结果使样品的容积增大，产生浓缩时需要花费时间等的问题。关于非专利文献1中记载的方法，在加入与用于洗涤玻璃过滤器上的残渣的乙醇相同量的乙醚及蒸馏水后，在减压下将乙醚溶液进行浓缩，因此如果洗涤时使用的乙醇的量越多，浓缩时的乙醚量也增多，所以进行浓缩时需要花费时间。此外，由于乙醚有可能发生突沸或引火，因此操作过程中不能转移视线，进行作业时比较费事。此外，操作时间延长时作为测定对象物的β-隐黄素受光、氧气的影响而发生劣化，并且会引起误差。

本发明的目的为，克服上述现有方法的缺点，提供简便且更加准确的定量方法。

本发明者发现，通过在果汁等试样中添加内标物质，可减少使用的溶剂量，削减进行浓缩操作所花费的时间、工夫、成本，进而可减少测定值的误差。此外还对此时使用的内标物质的种类进行了讨论。进而发现通过在皂化反应之前添加脱水剂，可降低测定值的偏差，于是完成了本发明。

即：本发明涉及以下内容：

1.一种方法，其为试样中的β-隐黄素的定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

将含有选自番茄红素或视黄醛的内标物质的二乙基醚溶液与所述试样进行混合，

抽取二乙基醚层，

在得到的二乙基醚层中加入脱水剂进行干燥，

干燥后加入碱溶液进行皂化反应，

反应后加入酸并静置后抽取二乙基醚层，

将得到的二乙基醚层供给高效液相色谱仪，使用内标法对β-隐黄素进行定量。

2.根据上述1所述的方法，其特征在于，内标物质为视黄醛。

3.根据上述1所述的方法，其特征在于，脱水剂为硫酸钠。