[发明专利]分离的单核细胞群及相关的治疗应用

说明书

政府支持的声明

本发明由美国政府提供了部分支持，美国国家卫生研究院批准号为：EY1254、EY14174和EY017540。因此，美国政府对本发明享有一定的权利。

相关申请的交叉引用

本主题专利申请主张申请号分别为61/208,173(2009年2月20日申请)和61/283,244(2009年11月30日申请)的美国临时专利申请的优先权利益。该些在先申请的全部公开以其所有内容并且基于所有的目的以引用的方式并入本发明中。

背景技术

眼部血管疾病，如与年龄相关的黄斑变性(ARMD)和糖尿病性视网膜病变(DR)分别归因于不正常的脉络膜或视网膜异常新生血管。它们在工业化国家是视力丧失的主要原因。由于视网膜由神经细胞、胶质细胞和血管元素的清晰可辨的层组成，所以诸如血管增生或水肿中所看到的那些相对小的干扰可导致视觉功能的显著丧失。遗传性视网膜变性，如色素性视网膜炎(RP)，也都与血管的异常，如小动脉狭窄和血管萎缩有关。每3500个个体中就有多达1个个体受到它们的影响，并且以下述症状为特征：渐进的夜盲、视野缺损、视神经萎缩、小动脉衰减和往往会发展到完全失明的中央视力丧失。虽然在辨别促进和抑制血管生成的因素方面已取得重大进展，但在减缓或扭转这些视网膜变性疾病的进展方面仍然没有有效的治疗方法。

本技术领域需要治疗和预防各种眼部血管疾病的更好的手段。本发明就是针对这种需求以及其他需求的。

发明内容

在一个方面，本发明提供含有表达CD33抗原和CD14抗原的基本上纯的单核细胞(monocyte)的分离的细胞群。这些分离的细胞群中的一些是从哺乳动物的外周血样本、脐血样本或骨髓样本中分离出来的。所述分离的细胞群中的一些是由人体细胞或鼠细胞组成。在所述分离的细胞群的一些中，所述细胞中至少有70％、80％或90％表达表面标志CD 14和CD33。一些分离的细胞群不含表达CD34的细胞。一些分离的细胞群基本不含ALDH^br细胞。所述分离的细胞群可以在体外或在活体外(ex vivo)进一步激活。这可以使用任何单核细胞激活化合物，例如，LPS、MPLA，或MCP-1完成。

在另一个方面，本发明提供治疗眼部血管疾病的方法。所述方法涉及给患有眼部血管疾病的受试者施予数量上足以治疗或改善所述眼部血管疾病的分离的单核细胞群。优选地，所述单核细胞群是从所述受试者的血液样本或骨髓样本中分离出来的。在一些优选实施方式中，使用所述方法治疗的所述受试者是人。在所述方法的一些中，所述单核细胞群包括基本上纯的CD14⁺/CD33⁺细胞。例如，所述分离的单核细胞群中的所述细胞至少有80％是CD14⁺/CD33⁺。在一些方法中，所述分离的单核细胞群在被施予受试者前在体外或在活体外激活。在这些实施方式中能够使用任何已知的能激活单核细胞的化合物。例如，所述分离的单核细胞细胞可以用LPS，MPLA，或MCP-1激活。在一些方法中，未经处理的单核细胞群(或在体外或在活体外激活的单核细胞群)与这样的单核细胞激活化合物对受试者联合给药。

许多眼部血管疾病是可以用本发明的方法治疗。例子包括缺血性视网膜病变、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、新生血管性青光眼、视网膜中央静脉阻塞(occlutions)、视网膜水肿，黄斑变性和色素性视网膜炎。在一些方法中，所述分离的单核细胞群是通过局部途径(a local route)，例如通过玻璃体内注射，对所述受试者给药的。在一些其他方法中，所述单核细胞群通过全身途径(a systemic route)，例如通过静脉注射，对所述受试者给药。

在相关的方面，本发明提供其他治疗或改善受试者眼部疾病的方法。这些方法需要(i)从患有眼部疾病的受试者的血液样本或骨髓样本分离出基本上纯的单核细胞群；以及(ii)将所述分离的单核细胞群对所述受试者给药，给药数量足以治疗或者改善所述眼部血管疾病。此外这些方法有些需要所述分离的单核细胞群在施予所述受试者前在体外激活。在这些实施方式中能够使用任何已知的能激活单核细胞的化合物。例如，所述分离的单核细胞可以用LPS、MPLA或MCP-1激活。在一些其他的实施方式中，所述分离的单核细胞群，不管有还是没有进一步在活体外激活，都与单核细胞激活化合物一起对所述受试者联合给药。