[发明专利]荧光检测方法、荧光检测装置以及程序

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光检测装置和荧光检测方法，其中，接收测量对象物受到激光照射后所发出的荧光，并对此时所得到的荧光信号进行信号处理。另外，本发明涉及计算机程序，使计算机执行在用特定频率调制的激光照射到测量对象物时作为测量对象物的荧光的荧光信号所得到的多个脉冲形状的荧光信号的信号处理。

特别是涉及下述一种荧光检测装置，该装置适用于如在医疗、生物领域应用的流式细胞仪等利用荧光色素发出的荧光对细胞或DNA或RNA等测量对象物进行识别和分析等的分析装置。

背景技术

应用于医疗、生物领域的流式细胞仪包括接收测量对象物的荧光色素受到激光照射后发出的荧光，由此识别测量对象物种类的荧光检测装置。

具体来说，流式细胞仪采用荧光试剂使浑浊液中的细胞、DNA、RNA、酶、蛋白等活体物质标签化，然后施加压力以使测量对象物在以每秒约10m以下的速度在管道内流动的鞘液中流动，由此形成分层鞘流。通过向该流动中的测量对象物照射激光，由此接收附着在测量对象物上的荧光色素发出的荧光，并将该荧光作为标签进行识别，由此特定测量对象物。

该流式细胞仪例如能够测量出细胞内的DNA、RNA、酶、蛋白质等在细胞内的相对量，且在短时间内能够对这些物质的作用进行分析。另外，可使用通过荧光对特定类型的细胞或染色体进行特定、并仅在特定的细胞或染色体以活着的状态下短时间内进行分选收集的细胞分类器等。

例如，用流式细胞仪分析DNA等活体物质时，通过荧光试剂荧光色素预先附着在该活体物质上。而且，该活体物质通过与后述的附着在微胶珠上的荧光色素不同的荧光色素标签化，并混合于包括在其表面上设置有羧基等特别的结构体、且直径为5～20μm的微胶珠的液体中。上述羧基等的结构体结合(耦合)于某个已知结构的活体物质。因此，当同时检测微胶珠发出的荧光和活体物质发出的荧光时，可知活体物质与微胶珠的结构体结合。由此能够分析活体物质的特性。准备具有多种耦合用的结构体的多种微胶珠，在短时间内要分析活体物质的特性需要非常多种类的荧光色素。

专利文献1中记载了以下内容。将微胶珠等作为测量对象物，用特定频率强度调制的激光照射到该测量对象物，求出此时发出的荧光的荧光弛豫时间。不同种类的荧光色素其荧光弛豫时间也不同，因此利用该荧光弛豫时间能够识别荧光种类并进一步识别测量对象物的种类。

专利文献1：特开2006-226698号公报

发明内容

上述专利文献1中，根据荧光弛豫时间能够在短时间内高效率地识别荧光，但是荧光弛豫时间的测量精度并不一定很高。例如，所接收的荧光弱且接收的荧光信号以多个脉冲形状的荧光信号离散的方式构成时，就无法求出求荧光弛豫时间时必要的相位差。

为了解决上述课题，本发明的目的在于，提供一种在所接收的荧光弱且接收的荧光信号以多个脉冲形状的荧光信号离散的方式构成时，能够高精度地求出荧光弛豫时间的荧光检测方法、荧光检测装置及其程序。

本发明的荧光检测方法是，接收测量对象物受到激光照射后发出的荧光，并对此时所得到的荧光信号进行信号处理的方法。该荧光检测方法的特征在于，包括以特定频率调制的激光照射到测量对象物的工序；接收所述测量对象物发出的荧光，输出多个脉冲形状的荧光信号的工序；设定与所述频率相对应的周期单位的基准时间的工序；在所述基准时间基础上，获得所述的各脉冲形状的荧光信号被输出为止的发生时间的工序；生成所述脉冲形状的荧光信号的发生频率和表示与所述发生时间的关系的累积荧光信号的工序；与所述激光调制相对应的信号作为参照信号，求出该参照信号和所述累积荧光信号之间相位差的工序；利用所述相位差求出测量对象物的荧光的荧光弛豫时间的工序。