[发明专利]胚胎组织块与胚胎共移植提高牛移植妊娠率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及家畜繁殖学领域，属胚胎生物技术的范畴，作为提高牛繁殖力的辅助技术。

背景技术

通过添加细胞因子，如牛滋养层蛋白质-1(bTP-1)(Thatcher et al.，1989；Bazer etal.，1991)，干扰素-a(IFN-a)(Plante et al.，1988；Plante et al.，1989)，干扰素-τ(IFN-τ)，重组蛋白(Mayer et al.，1995；Martal et al.，1997)，增强妊娠识别信号，有效地延长周期黄体寿命，提高胚胎移植后的受胎率。由于这些蛋白的分离纯化和检测过程复杂，因此在胚胎移植技术中并未广泛应用。

杨亚卫等(2002)试验结果，波尔山羊单胚移植的妊娠率为54.1％(53/98)、双胚为57.7％(77/49)、三胚为66.70％，差异不显著(P＞0.05)。陈军等(2007)报道移植三胚、双胚与移植单胚的受体羊妊娠率分别为71.43％、64.52％和52.50％，差异不显著。

有研究结果表明，受体牛妊娠率随半胚移植数目的增加而上升，移植双半胚较单一全胚妊娠率高，移植效果好，主要是因两枚半胚有较多的滋养层细胞，为胚胎存活奠定了基础。

Heyman等(1987)将2个滋养泡与冻胚共移植49头受体牛，45d、60d和90d妊娠率分别为73％、61％和57％；对照组53头受体牛45d、60d和90d妊娠率分别为43％、42％和40％。试验证明了由于冷冻对胚胎造成的损伤可以通过添加滋养泡来克服，提高妊娠率。2005年，Hashiyada等(2005)将体外受精体内培养的胚胎所获得的不同直径的滋养泡与半胚共移植，26-43d，38-73d分别获得66.7％(16/24)和54.2％(13/24)的妊娠率，对照组两次妊娠率均为34.5％(10/29)；试验组产犊率为41.7％(10/24)，对照组为27.6％(8/29)。实验证明，添加滋养泡与半胚共移植能加强妊娠识别信号，提高胚胎妊娠率。通常，滋养泡(Trophoblastic Vesicles，TVs)是由供体受精后14d孕体获得，即去除胚盘的胚泡。直径为0.4-2.0mm滋养泡与胚胎共移植，都能够阻止黄体溶解，但试验证明妊娠率并不受滋养泡直径大小的影响。实验证明，添加滋养泡与半胚共移植能加强妊娠识别信号，提高胚胎妊娠率。实验组和对照组受体牛所产牛犊的初生重无差异，具有正常的形态学特征；实验组牛犊通过与亲本血型鉴定，犊牛遗产同一性并未受到滋养泡的影响。同时试验还证明了妊娠率并不受滋养泡直径大小的影响。

我国胚胎移植发展起步较晚，尤其是在产业化方面，与美国和加拿大等发达国家有较大差距。胚胎移植妊娠率是直接影响其产业化效益的主要因素。本发明借鉴国外相关提高牛胚胎移植妊娠率的研究方法和研究思路，旨在探索出一种能够提高牛胚胎移植妊娠率的有效途径。

发明内容

本发明的目的是从生产应用出发，通过将C级胚胎及用雄性胚胎(胚胎性别鉴定后的副产品)制作的胚胎块和胚胎滋养层分别与可用胚胎共移植，达到增强妊娠识别信号的目的，从而提高胚胎移植妊娠率。

胚胎组织块与胚胎共移植提高牛移植妊娠率的方法，其特征是将胚胎组织块或滋养层组织块与可用胚胎共移植到一头受体母牛子宫中。

所述组织块来源为：经超数排卵处理后所采集的7-8日龄体内受精牛胚胎，1级和2级用于胚胎冷冻、PCR性别鉴定和胚胎移植，3级胚胎和PCR性别鉴定后的奶牛雄性胚胎可用于制作胚胎组织块。

所述胚胎组织块的制作步骤为：用双面刀片线切割成显微手术刀；做洗刀平皿清洗消毒，以减少污染，降低由于刀粘性增大对胚胎造成的损害；做分割液滴洗胚胎，将胚胎分割成8份并回收。

所述滋养层组织块制作步骤为：胚胎体外培养，将发育到囊胚或扩囊期的胚胎洗涤并切取滋养层(即囊胚腔)，将其再分为3-4份并回收。

所述胚胎体外培养的方法为二氧化碳培养箱培养法或恒温试管架培养法。

所述受体母牛为同期发情或自然发情后7.0-8.0天的黄体合格的母牛。

所述共移植步骤为：选1-2块胚胎组织块或滋养层组织块与将要移植的胚胎放在一起，用4段液法装入一支细管中段，细管装入移植枪，将胚胎和组织块一同移植到受体有黄体一侧子宫角的上1/3——1/2处。

本发明将雄性胚胎或3级胚胎切割后与可用胚胎共移植，利用组织块或滋养层中的滋养泡增强妊娠识别信号，相比较滋养层蛋白或干扰素等细胞因子的分离纯化和检测，本方法操作简便，应用性强。

附图说明：