[发明专利]一步酶法制备7-氨基头孢烷酸无效
申请号: | 201010622359.4 | 申请日: | 2010-12-28 |
公开(公告)号: | CN102154429A | 公开(公告)日: | 2011-08-17 |
发明(设计)人: | 赵玉新;黄宇红;韩东胜;邹国利;刘治林;户巧芬;杨佳宁;李国峰;徐丹 | 申请(专利权)人: | 哈药集团制药总厂 |
主分类号: | C12P35/02 | 分类号: | C12P35/02 |
代理公司: | 北京华科联合专利事务所 11130 | 代理人: | 王为 |
地址: | 150086 黑*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一步 法制 氨基 头孢 | ||
技术领域:
本发明涉及一种酶裂解法的应用,具体而言是涉及一种用于制备7-氨基头孢烷酸的一步酶法应用。
背景技术:
7-氨基头孢烷酸,又名:7-氨基头孢霉烷酸(7-aminocephalosporanic acid,7-ACA),结构式:
是目前半合成头孢菌素的重要基础原料,目前工业上通常由头孢菌素C(CephalosporinC,CPC),通过化学法或二步酶法裂解制备,脱去7-位的D-α-氨基己二酸侧链得到7-ACA.
化学法生产7-ACA,有着大量排泄环境污染物质的致命缺陷,这与今日的环境保护概念格格不入,后来发展出二步酶法生产7-ACA,用头孢菌素C通过两种酶,即D-氨基酸氧化酶及戊二酰7-ACA酰化酶的作用,可以生成7-ACA。1990年《中国科学报》报导了中国科学院植物生理研究所,以头孢菌素C为原料,二步酶法制备7-ACA获得成功。1986年日本有了一步酶法制备7-ACA的专利申请。二步酶法虽然解决了化学法的污染环境问题,但是二步酶法在收率、纯度及成本方面显得有些不足,并且后一步GL-7-ACA的工艺过程较难控制。
中国专利CN200510089965提供了一种从头孢菌素C制备7-氨基头孢霉烷酸的两步酶法,其中所用的D-氨基酸氧化酶为一种经纯化的三角酵母D-氨基酸氧化酶突变体。
中国专利CN94112285提供一种一步两酶法从头孢菌素C制造7-氨基头孢霉烷酸的方法。即在一个反应器的水相系统中加入D-氨基酸氧化酶、GL-7ACA酰化酶。
中国专利CN 200410016825.9以D-氨基酸氧化酶(DAAO)氧化头孢菌素C生产戊二酰-7-氨基头孢酶烷酸(GL-7-ACA),再由GL-7-ACA酰化酶催化脱酰生产7-ACA。以及中国专利CN200410039573一种生产7-氨基头孢烷酸的方法,CN200310113563一种生产7-氨基头孢烷酸的方法及其专用重组酶公开的方法也存在同样的问题。
虽然一步酶法制备7-氨基头孢霉烷酸比二步酶法优越,但采用不同的酶其效率具有很大的不同,其具体的处理方法也会对产物的收率和纯度产生影响,
现有技术公开了一种一步酶法制备7-氨基头孢霉烷酸的方法,但对制备条件没有充分说明,本发明通过筛选,找到最佳的生产条件,获得了一种方法,兼有了化学法(高收率和高纯度)和二步酶法(环保和高收益)的优点,同时比现有一步酶法更加简洁,产物收率更高,纯度更高,反应条件更加温和快速,大大节省了生产成本。
发明内容:
本发明的目的是提供一种一步酶法制备7-氨基头孢霉烷酸的工艺方法,本发明的方法克服了现有技术的缺陷。
本发明的制备7-氨基头孢烷酸的方法,经过以下四个步骤:
步骤1,头孢菌素C发酵液的处理;
步骤2,头孢菌素C在头孢菌素C酰基转移酶的作用下进行酶解反应得到7-氨基头孢霉烷酸;
步骤3,对酶解后得到的7-氨基头孢霉烷酸裂解液进行处理;
步骤4,7-氨基头孢霉烷酸的结晶和干燥。
其中,
步骤1中所取用的头孢菌素C发酵液需经预处理得到适当浓度及纯度方可进行酶解反应。
步骤2中酶解反应过程要恰当控制反应PH、酶用量等参数,优选的头孢菌素C酰基转移酶是(NRB-103)购买自NURIBIOTECH Co.,Ltd公司。
步骤3中7-氨基头孢霉烷酸裂解液采用浓缩,脱炭、过滤等措施处理,使其达到结晶前的良好状态。
步骤4中为获得良好的7-氨基头孢霉烷酸结晶产品,选用了最优的结晶方法。
本发明优选的方法,经过以下四个步骤:
步骤1,取头孢菌素C发酵滤液,过滤,调pH到9-10。
步骤2,头孢菌素C酰基转移酶(NRB103)和头孢菌素C在室温下反应,直到用高效液相仪鉴测7-氨基头孢霉烷酸完全生成,控制反应pH在9-10。
步骤3,向上一步得到的7-氨基头孢霉烷酸反应液中加入Na2S2O4,调pH6-7,加吐温80和二氯甲烷,分相,在水相中加入活性炭和EDTA,过滤得7-氨基头孢霉烷酸液体。
步骤4,7-氨基头孢霉烷酸液体调pH值使成为酸性,析出结晶后,滤出结晶,用丙酮洗涤,干燥。
本发明的一步酶法兼有了化学法(高收率和高纯度)和二步酶法(环保和高收益)的优点,比较结果如下:
附表1.现有技术与本发明一步酶法比照表
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