[发明专利]一种利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药，其特征在于：以中国明对虾血细胞总RNA的反转录产物为模板，采用引物PF1和PR1进行PCR扩增，SEQ ID No.1所示的扩增产物经修饰后转入水稻中，携带扩增产物的转基因再生苗种植后的米糠即为渔药。

2.按权利要求1所述的利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药，其特征在于：将转入水稻中的SEQ ID No.1所示的扩增产物按如下步骤修饰后再转入水稻中；

1)通过T4连接酶将SEQ ID No.1所示的扩增产物连接入pMD 18-T载体上待用；

2)用Sal I和Xba I分别双酶切携带penaeidin(SEQ ID No.1)的上述T-载体和pBluscript空载体，得到连接有SEQ ID No.1所示的酶切片段和线性化的pBluscript空载体，待用；

3)通过T4连接酶将步骤2)连接有SEQ ID No.1所示的酶切片段连接入到用Sal I和Xba I分别双酶切的pBluscript空载体中，在连接后pBluscript-penaeidin质粒中SEQ ID No.1上游引入KpnI酶切位点，待用；

4)用KpnI和Xba I分别酶切上述步骤3)引入酶切位点的pBluscript-penaeidin质粒和已经连接有35S启动子和终止子的植物表达载体pCAMBIA1305.2，得到连接有SEQ ID No.1所示的酶切片段和线性化的pCAMBIA1305.2空载体，待用；

5)通过T 4连接酶将步骤4)酶切后携带SEQ ID No.1的片段连接到步骤4)酶切后植物表达载体pCAMBIA1305.2，得到植物表达载体pCAMBIA1305-penaeidin5-3。

3.按权利要求1所述的利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药，其特征在于：所述引物PF1和PR1分别为：PF1：agcctcacctgcagagaccgPR1：tgcacttacatcccacat。

4.一种权利要求1所述的利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药的制备方法，其特征在于：以中国明对虾血细胞总RNA的反转录产物为模板，采用引物PF1和PR1进行PCR扩增，SEQ ID No.1所示的扩增产物经修饰后通过农杆菌介导法转入水稻中，携带扩增产物的转基因再生苗的米糠即为渔药；所述引物PF1和PR1分别为：PF1：agcctcacctgcagagaccg PR1：tgcacttacatcccacat。

5.按权利要求1所述的利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药的制备方法，其特征在于：将转入水稻中的SEQ ID No.1所示的扩增产物按如下步骤修饰后再转入水稻中；

1)通过T4连接酶将SEQ ID No.1所示的扩增产物连接入pMD 18-T载体上待用；

2)用Sal I和Xba I分别双酶切携带penaeidin的上述T-载体和pBluscript空载体，得到连接有SEQ ID No.1所示的酶切片段和线性化的pBluscript空载体，待用；

3)通过T4连接酶将步骤2)连接有SEQ ID No.1所示的酶切片段连接入到用Sal I和Xba I分别双酶切的pBluscript空载体中，在连接后pBluscript-penaeidin质粒中SEQ ID No.1上游引入KpnI酶切位点，待用；

4)用KpnI和Xba I分别酶切上述步骤3)引入酶切位点的pBluscript-penaeidin质粒和已经连接有35S启动子和终止子的植物表达载体pCAMBIA1305.2，得到连接有SEQ ID No.1所示的酶切片段和线性化的pCAMBIA1305.2空载体，待用；

5)通过T 4连接酶将步骤4)酶切后携带SEQ ID No.1的片段连接到步骤4)酶切后植物表达载体pCAMBIA1305.2，得到植物表达载体pCAMBIA1305-penaeidin5-3。

6.一种权利要求1所述的利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药的应用，其特征在于：将上述制备所得渔药即携带转基因抗菌肽的再生苗种植后所得的米糠加入饲料中投喂给鱼，其中米糠的加入量为饲料质量的15-20％。

7.权利要求7所述的利用水稻作为生物反应器的蛋白渔药的应用，其特征在于：所述渔药对养殖大菱鲆的病害具有防治作用。