[发明专利]双胶乳法测定血清或尿液中游离轻链的液体双试剂试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及本发明属于医学免疫学领域，涉及一种免疫检测试剂，进一步地，本发明涉及一种测定血清或尿液中免疫球蛋白游离轻链的试剂。

背景技术

免疫球蛋白(Immunoglobulin，简称Ig)是具有抗体活性或化学结构与抗体类似的球蛋白统称，大量存在于正常人血清中，尿液中也有微量存在。Ig分子结构由两条重链(Heavy chain，H链)和两条轻链(Light chain，L链)以及二硫键构成的“Y”型球蛋白。人的免疫球蛋白根据其重链不同分为IgM、IgG、IgA、IgD、IgE，对应的重链依次为μ、γ、α、δ、ε；轻链分κ(kappa)和λ(lambda)2种类型，任何一种免疫球蛋白都含有两条相同类型的轻链即κ型或λ型，人类总的κ(kappa)和λ(lambda)的比例约为2∶1。

免疫球蛋白轻链(κ或λ)是由浆细胞产生的一种小分子量(2.2kD或4.4kD)的蛋白质。健康人血中有近40％的游离轻链(Free light chain，FLC)，κFLC和λFLC的含量分别为3～19mg/l和6～26mg/l，κFLC/λFLC即κ/λ正常比值在0.26～1.65之间。此外λFLC较κFLC更易通过二硫键形成二聚体，而后者通常保持单体状态。

正常情况下游离轻链和重链的分泌是平衡的，而当浆细胞发生单克隆恶性增殖时，会产生大量未和重链结合的FLC，改变了κ/λ比值。若比值＞1.65则表明κ轻链过量，患者产生单克隆κ轻链；若比值＜0.26则是λ轻链过量，患者产生单克隆λ轻链。FLC可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管被重吸收回到血循环中，所以正常人尿中只有少量FLC存在。当代谢失调或发生多发性骨髓瘤时，血中出现大量FLC，并由尿中排出，即产生所谓的本周氏蛋白(Bence-Jones protein，BJP，亦称M蛋白)。

本周氏蛋白是迄今为止发现的第一个特殊的肿瘤标记物，可用来鉴定和监控包括多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)、淀粉样变性(amyloidosis，AL)等多种B细胞恶性增殖疾病，具有较高的临床价值。

近年来，随着多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)、淀粉样变性(amyloidosis，AL)等多种B细胞恶性增殖疾病研究的不断深入，临床上的诊断指标逐步由对血中免疫球蛋白的监测，到血或尿中轻链(总轻链，包括游离型及免疫球蛋白的结合型)的监测，再到目前倡导的针对血中游离轻链的监测并计算κ/λ比值。研究之所以得出这样一个结论，主要有以下几点依据：一、对病人血清中游离轻链的监测比传统的免疫球蛋白测定可以更快更好的作出诊断，原因是：游离轻链的半衰期很短，平均只有2～6时，而免疫球蛋白的半衰期一般较长，IgG的半衰期更长达20-25天，是前者的上百倍。理论上游离轻链水平可以实时反映患者的病情及治疗效果；二、单一的针对尿液中游离轻链的测定不能够准确的对病情作出判断，原因是：正常情况下，FLC升高在尿液和血清中可同步检测到，如果B细胞恶性增殖疾病患者中伴随肾衰情况下，尿液中轻链检测不到变化造成误诊，而血清中FLC的测定不会受到干扰，在诊断上更加准确。而且用尿做样本时需收集病人的24小时尿，样本量较大、稳定性较差。

尽管研究表明血中游离轻链监测的临床意义很高，但受以下几个方面影响，血清中游离轻链的测定发展较为缓慢。一、传统方法灵敏度较低，不能准确定量，如：电泳法、免疫固定电泳法等，本发明中使用的双胶乳法具备了足够高的灵敏度；二、特异性抗体制备技术，血清中免疫球蛋白的量是游离轻链的几千倍，要准确测定血清中FLC的含量就要克服血清中大量免疫球蛋白的干扰，特异性抗体的选择十分重要，如果选择的抗体特异性差就会与完整免疫球蛋白的轻链发生交联反应造成结果失真。早期制备的针对游离轻链隐蔽位点抗体可特异性识别结合相应的游离轻链，但单克隆抗体效价较低，一般不适用于免疫比浊法(胶乳增强法是免疫比浊法的一类，即单克隆抗体不适于胶乳增强免疫比浊法)，但现在可以自制或购买到针对游离轻链多个隐蔽位点的抗体，因此使胶乳增强免疫比浊法的应用成为可能；三、正常人体中血清中FLC的含量很低，但发生B细胞良性或恶性增殖病变时其含量会超出正常的几十倍，因此要求FLC的测定方法不仅要具备灵敏度高、特异性强还要线性范围宽。