[发明专利]一种链霉菌微型转座突变系统及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201010610631.7 | 申请日： | 2010-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN102154268A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 丁晓明;张欣城;鲍芸;张渤;张霖;赵国屏 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/63;C12N15/113 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;盛志范 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 霉菌 微型 突变 系统 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一对IS204的转座酶识别序列，其特征在于为IRL和IRR位点，其序列分别为SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示。
2.一个用于转座的质粒，其特征在于由基于权利要求1所述的转座酶识别位点序列所构建，序列如SEQ ID No. 20所示，记为pDZY101。
3.如权利要求2所述转座质粒的相应元件，其特征在于包括质粒复制起始位点、抗药性基因、转座酶基因、接合转移起始位点、红霉素启动子以及转座酶识别位点IRL、IRR-1和IRR。
4.如权利要求2所述转座质粒的构建方法，其特征在于具体步骤如下：
以红色糖多孢菌Saccharopolyspora erythraea为模板，用引物SEQ ID No. 3和引物SEQ ID No. 4扩增红霉素启动子片段，引物两端分别设计有XbaI和BamHI的限制性内切酶识别位点，把PCR产物片段与pMD19-T载体做T-A克隆后转化大肠杆菌，挑取阳性转化子并提取质粒DNA，即为pT-ermE ；以诺卡氏菌Nocardia asteroids(mexicana) YP21基因组为模板，以引物SEQ ID No. 5和引物SEQ ID No. 6扩增转座酶基因片段，引物两端分别设计有BamHI和EcoRI的限制性内切酶识别位点， 用BamHI和EcoRI酶切该PCR产物片段和质粒pT-ermE，然后连接所得的两条线性片段，转化大肠杆菌，挑取阳性转化子并提取质粒DNA，即为pT-ermE-tnp；用XbaI和EcoRI分别酶切质粒pBY102和pT-ermE-tnp，再把所得线性片段用T4 DNA连接酶连接，转化大肠杆菌，挑取阳性转化子并提取质粒DNA，即为pDZY101。
5.如权利要求2所述转座质粒的衍生质粒，记为pDZY102~ pDZY107，其特征在于：
在衍生质粒pDZY102结构图中：
在衍生质粒pDZY103结构图中：
在衍生质粒pDZY104结构图中：
在衍生质粒pDZY105结构图中：
在衍生质粒pDZY106结构图中：
在衍生质粒pDZY107结构图中：
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