[发明专利]重组杆菌溶素的表达和应用

权利要求书

1.一种截短芽孢杆菌的杆菌溶素基因，该基因具有如SEQ ID NO：1所示的核酸序列。

2.一种截短芽孢杆菌的杆菌溶素蛋白，该蛋白具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

3.一种制备重组杆菌溶素的方法，包括以下步骤：

1)根据SEQ ID NO：1所示的核酸序列进行全基因合成，从而得到SEQ ID NO：1所示的核酸序列的截短芽孢杆菌的杆菌溶素基因；

2)用步骤1)获得的核酸序列与表达质粒进行重组，对重组子进行验证以确定重组表达质粒的序列正确；

3)用步骤2)获得的重组表达质粒转化宿主细胞；

4)培养宿主细胞获得杆菌溶素包涵体蛋白；

5)将步骤4)得到的杆菌溶素包涵体蛋白通过复性液进行复性，得到有活性的可溶的重组杆菌溶素。

4.根据权利要求3所述的制备重组杆菌溶素的方法，其特征在于步骤5)中所述的复性液包含pH7.5的1M Tris-Cl、50mM ZnCl₂、100mMCaCl₂和0.25M Arg。

5.根据权利要求3所述的制备重组杆菌溶素的方法，其特征在于：所述表达载体为原核表达载体。

6.根据权利要求5所述的制备重组杆菌溶素的方法，其特征在于：所述原核表达载体为pET28b。

7.根据权利要求3所述的制备重组杆菌溶素的方法，其特征在于：所述的宿主细胞表达所述重组表达质粒，并且校正大肠杆菌密码子偏好性。

8.根据权利要求7所述的制备重组杆菌溶素的方法，其特征在于：所述的宿主细胞为大肠杆菌Rosetta-gami II(DE3)。

9.根据权利要求3所述的制备重组杆菌溶素的方法，其特征在于：培养所述宿主细胞的培养基为含抗生素基础培养基，培养温度为35℃～37℃，培养时间为4～5小时，诱导温度为35℃～37℃，诱导时间为3～5小时，诱导物IPTG终浓度为0.5～1mM。

10.根据权利要求3所述的制备重组杆菌溶素的方法，其特征在于：步骤5)中所述的活性通过下述方法测定：取杆菌溶素溶液200μl，以浓度为2％酪蛋白底物缓冲液为底物，40℃恒温水浴20min，加入福林-酚试剂1ml保温显色20min后，在波长660nm处进行比色测定，对照标准曲线，计算酪氨酸含量。