[发明专利]CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载树突状细胞的制法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞在制备抗脑胶质瘤药物中的应用、以及包括该树突状细胞的疫苗。特别地，本发明涉及CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞及其制备方法、该CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞在制备抗脑胶质瘤药物中的应用、以及包括该CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞的疫苗。

背景技术

目前脑胶质瘤的治疗方法包括手术治疗、放射治疗和化疗。但现有的脑胶质瘤治疗方法不能根治脑胶质瘤。主要原因是构成脑胶质瘤的细胞中含脑胶质瘤干细胞，其具有细胞的生物学特性，即自我更新、多潜能分化、高耐药性的(例如对化疗药物的高耐药性的及对放射治疗的高耐辐射性)及极少数的脑胶质瘤干细胞还驱动脑胶质瘤的形成。因此脑胶质瘤干细胞是脑胶质瘤发生和发展(脑胶质瘤的生长、脑胶质瘤产生耐药性的、脑胶质瘤复发和脑胶质瘤转移等)的真正元凶。

现有技术已尝试使用树突状细胞免疫治疗方法来治疗癌症，即从患者脑胶质瘤中将脑胶质瘤细胞分离出来，通过裂解该脑胶质瘤细胞得到抗原，并将该抗原负载到患者的树突状细胞上。如此得到的靶向脑胶质瘤细胞的树突状细胞，可以用于治疗癌症。例如：CN1705489A中公开了将肿瘤细胞制备得到的抗原负载到树突状细胞上，并用所得树突状细胞治疗癌症的方法。

现有技术仅公开了如何得到相关脑胶质瘤干细胞，但并未教导对获取的脑胶质瘤干细胞进行处理。并且，现有技术的上述方法虽然以脑胶质瘤细胞为靶标，但是该方法仍然存在脑胶质瘤在放疗和化疗后耐药性、复发率和转移率高的问题。

发明内容

为了克服现有以脑胶质瘤细胞为靶标的癌症免疫治疗方法仍然存在脑胶质瘤在放疗和化疗后耐药、复发和转移的问题，本发明的目的是提供一种CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞及其制备方法、该CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞在制备抗脑胶质瘤药物中的应用、制备该CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞的试剂盒，以及包括该CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞的疫苗。

多数认为经与大剂量化疗药物接触后，脑胶质瘤细胞会被全部杀死，但是后来发现，在一定范围内经与大剂量化疗药物接触后，脑胶质瘤细胞不但不会被完全杀死，而且还存在少量的脑胶质瘤干细胞，起着对脑胶质瘤的耐药性、复发和转移。

本发明提供了一种CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞的制备方法，该方法包括：通过裂解CD133+脑胶质瘤干细胞得到脑胶质瘤干细胞抗原组合物，将树突状细胞与CD133+脑胶质瘤干细胞抗原组合物接触得到负载脑胶质瘤抗原的抗癌树突状细胞，其中，所述CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载树突状细胞通过以下方法制备，该方法包括：

所述分选方法为在分离分选中使用CD133单克隆抗体偶联的免疫磁珠或通过CD133流式抗体进行流式细胞仪的分选技术，在组织直接来源和培养扩增后的脑胶质瘤干细胞进行分离分选得到的脑胶质瘤干细胞。

所述脑胶质瘤干细胞经过热休克和反复冻融得到脑胶质瘤干细胞抗原组合物；将所述的脑胶质瘤干细胞抗原组合物与树突状细胞接触，制备得到CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞。

本发明还提供了一种CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞疫苗，所述树突状细胞疫苗包括树突状细胞，其特征在于，所述树突状细胞为本发明所述的CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞。

本发明还提供了本发明的CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞疫苗在制备抗脑胶质瘤药物中的应用。

由于本发明的脑胶质瘤干细胞经过分选，由此得到的脑胶质瘤干细胞更具有特异的靶向性，因此，由本发明提供的CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞的药物，能够在体内和体外杀死引起脑胶质瘤复发的脑胶质瘤干细胞，从而为脑胶质瘤的根治提供了可能。

附图说明

图1为制备例1和2的脑胶质瘤干细胞通过流式细胞术检测的细胞流式图；

图2CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载树突状细胞，流式细胞仪检测负载DC表型变化情况。

图3显示了由所示经分选后的制备例1和未分选的制备例1所得两种抗原组合物分别负载树突状细胞，得到两种细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，由该两种CTL细胞分别对化疗药物分选的以及未分选的脑胶质瘤细胞产生的应答结果对比图。

具体实施方式

本发明提供了一种CD133+脑胶质瘤干细胞的制备方法，其中，该方法包括：

对脑胶质瘤干细胞进行分离分选的步骤，