[发明专利]CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载树突状细胞的制法及其应用

权利要求书

1.一种CD133+脑胶质瘤干细胞抗原负载的树突状细胞的制备方法，该方法包括：通过裂解脑胶质瘤干细胞得到脑胶质瘤干细胞抗原组合物，将树突状细胞与脑胶质瘤干细胞抗原组合物接触得到负载脑胶质瘤抗原的抗癌树突状细胞，其特征在于，所述脑胶质瘤干细胞通过以下方法制备，该方法包括：

对脑胶质瘤干细胞进行分离分选的步骤，

所述分离分选通过使脑胶质瘤干细胞通过分选完成，所述分选方法选自免疫磁珠法、流式细胞术、亲和板结合分离法和免疫溶解法中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述细胞分选方法为免疫磁珠法和流式细胞术。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法包括：

对脑胶质瘤干细胞进行分离分选的步骤，

所述分选方法为在分离分选中使用CD133单克隆抗体偶联的免疫磁珠或通过CD133流式抗体进行流式细胞仪的分选技术，在组织直接来源和培养扩增后的脑胶质瘤干细胞进行分离分选得到的脑胶质瘤干细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述脑胶质瘤选自由星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、转移性脑胶质瘤和复发性脑胶质瘤所组成的组中。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括从离体脑胶质瘤组织和/或脑胶质瘤细胞系中分离脑胶质瘤干细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述裂解脑胶质瘤干细胞的步骤包括热休克和/或反复冻融；所述热休克的条件包括在37～50℃下保持1h-6h；所述反复冻融的次数为3-5次两次的间隔时间是10min-2h，所述冷冻的温度范围是零下120℃-零下196℃，所述融化的温度范围是10℃-37℃。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述裂解脑胶质瘤干细胞的步骤包括热休克和反复冻融；所述热休克的条件包括在40-45℃下保持1h-4h；所述反复冻融的次数为3-5次两次的间隔时间是20min-1h，所述冷冻的温度范围是零下120℃-零下196℃，所述融化的温度范围是20℃-37℃。

8.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脑胶质瘤干细胞抗原组合物裂解自细胞浓度为1×10⁵到1×10⁸细胞/mL的脑胶质瘤干细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述正常树突状细胞与制备脑胶质瘤干细胞抗原组合物的脑胶质瘤干细胞来自同一个体，或脑胶质瘤干细胞来自脑胶质瘤干细胞系培养获得的。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述正常树突状细胞与脑胶质瘤干细胞抗原组合物接触的时间是1-12h。

11.由权利要求1-10中任意一项所述的方法得到的抗癌树突状细胞。

12.一种树突状细胞疫苗，所述树突状细胞疫苗包括树突状细胞，其特征在于，所述树突状细胞为权利要求14所述的抗癌树突状细胞。

13.根据权利要求12所述的疫苗，其中，所述疫苗包括1×10⁵到5×10⁷个/mL所述抗癌树突状细胞。

14.根据权利要求13所述的疫苗，其特征在于，所述组合物还包括人血白蛋白；其中，以所述组合物为基准，所述人血白蛋白的含量为1-5重量体积％。

15.权利要求14所述的抗癌树突状细胞在制备抗脑胶质瘤药物中的应用。