[发明专利]南方型玉米锈病病原真菌的检测引物及分子检测方法

权利要求书

1.一种南方型玉米锈病病原真菌的检测引物，其核苷酸序列如下：

上游引物：5’- CTCCAAGAACTTCCTCCTC -3'，

下游引物：5’- TGACATGAAGTAGAAATTCT -3'。

2.根据权利要求1所述南方型玉米锈病病原真菌的特异引物，其特征在于，与所述检测引物相对应的南方型玉米锈病病原真菌的DNA特征片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述南方型玉米锈病病原真菌的特异引物，其特征在于，所述上游引物和下游引物对南方型玉米锈病病原真菌特异性扩增出约544 bp的产物。

4.权利要求1所述检测引物在对南方型玉米锈病病原真菌的鉴别和检测中的应用。

5.一种南方型玉米锈病病原真菌的分子检测方法，包括以下步骤：

 提取玉米叶片基因组DNA；

 PCR扩增，分别在PCR薄壁管中依次放入：

10′Buffer 2.5μL、25mmol/LMgCL₂ 2.0μL、2.5mmol/LdNTP 2.0μL、权利要求1所述上游引物和下游引物2mmol/L各2.5μL、玉米叶片基因组DNA 10～50ng、Taq DNA聚合酶1.0U，最后以无菌去离子水补齐至25μL；离心10sec后进行PCR扩增；扩增条件为：第一循环95℃预变性5min；然后94℃变性 45sec，55℃退火45sec，72℃延伸 90sec，共30个循环；最后一循环，72℃延伸10min补齐末端，扩增完成；

 上步所得PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上用1×TAE缓冲液中电泳分析，电压为4-5V/cm，电泳结束后用凝胶成像系统分析；

④ 在544 bp处出现特异条带，说明玉米叶片带南方型玉米锈病病原真菌，反之，则不携带该病原真菌。