[发明专利]一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体/牛成纤维细胞及其方法

说明书

技术领域

本发明属于转基因克隆动物技术领域，涉及转基因克隆胚的核供体细胞的构建，特别涉及到一种整合牛NRAMP1巨噬细胞特异性表达载体的牛成纤维细胞。

背景技术

布氏杆菌病(Brucellosis)是由布氏杆菌(Brucella abortus)引起人畜共患的一种慢性传染病，其临床特点主要表现为流产、长期发热、睾丸炎、腱鞘炎和关节炎等，病理特征为全身弥漫性网状内皮细胞增生和肉芽肿结节形成。本病所累及的组织器官很广泛，以单核-巨噬细胞系统、骨关节系统、神经系统等最为常见。布氏杆菌为细小的短杆状或球杆状，不产生芽胞，革兰氏阴性的杆菌。病原布氏杆菌共分为牛、羊、猪、沙林鼠、绵羊和犬布氏杆菌六种。病原菌主要通过体表皮肤粘膜的接触传播，亦可通过消化道传播，且可以通过含有布氏杆菌的气溶胶感染人或动物。布氏杆菌病严重地危害人类的身心健康并影响畜牧业的发展。

人感染布病常常是缓慢发病，轻度感染者仅感到疲乏，头痛，关节肌肉酸痛，或无任何自觉症状，典型病例表现体温热型呈波浪状、寒颤、关节痛、神经痛、睾丸炎、滑囊炎、腱鞘炎，个别患者关节硬化。人患布氏杆菌病后严重影响人的生活和生育能力。布病引起雌性动物流产、不孕等症状，母畜流产后多伴发胎衣停滞和子宫内膜炎，影响妊娠并导致不育。布病可引起雄性动物则出现睾丸炎和附睾炎，导致配种能力降低，造成严重经济损失。

在世界200多个国家和地区中，170多个国家和地区有布氏杆菌病存在和流行。约占世界1/5-1/6的人口受布病的威胁，全世界现约有500-600万人患布氏杆菌病，年新发病人约有50万(布合丽切木·依干巴地，等.布鲁氏杆菌病的危害及其防治.草食家畜，2007，3：60-61)。在中国有25个省(市)、自治区有布氏杆菌病存在和流行，1200多个县市为布鲁氏杆菌病疫区，约有3.5亿人遭受布氏杆菌病威胁，(尚德秋.布鲁氏杆菌病研究进展.中国地方病防治杂志，2004，19(4)：204-212)。

布氏杆菌在体内广泛分布且是兼性细胞内寄生菌，普通药物不易生效。目前对于本病的治疗尚无理想的方法，一般采用检疫、淘汰病畜来防止动物的流行和扩散，仍是以预防为主。在疫苗接种过程中也存在一系列问题(赵富有；等.布氏杆菌病防控及疫苗使用的探讨.兽医导刊，2010，3：24-27)，如有些菌苗由于菌株毒力过大，接种反应强烈，有些菌苗效力还不十分理想，有些菌苗不能用于怀孕动物，还有的菌苗不能用于成年动物、种公畜和患病动物等，这些因素限制了菌苗的应用，造成接种密度不高而影响防治效果。