[发明专利]一种萎缩芽孢杆菌及其制剂和应用

说明书

技术领域

本发明涉及水产应用微生物技术领域，特别涉及一种萎缩芽孢杆菌以及利用该萎缩芽孢杆菌生产微生物制剂及其制备方法和应用。 

背景技术

肠道益生菌是一种大多来源于消化道又作用于消化道的活菌制剂，能有效补充动物消化道内的有益微生物，抑制病原菌的生长，改善消化道菌群平衡，提高水产动物的免疫机能或者生长速度。 

刺参(Apostichopus japonicus Liao，又称仿刺参)，属无脊椎动物，棘皮动物门，海参纲，仿刺参属。因其营养价值高，养殖规模不断扩大，目前已经发展成为我国沿海最大的海水养殖品种之一。近年来由于刺参高密度养殖和不规范运作以及病害防治技术的相对滞后，病害问题日趋突出，尤其养殖刺参“腐皮综合征”的暴发，造成了严重的经济损失，制约了该产业的健康持续发展。由于刺参特殊的生活习性和养殖特点，且抗生素药物等疾病预防措施本身又存在一些缺点和局限性，故采用微生态制剂将成为防止刺参养殖疾病发生的有效措施之一。 

芽孢杆菌是目前最常用的益生菌种类。本发明根据来源于自然，回归自然的原则，从海参肠道筛选出具有拮抗刺参病原菌和高产酶活性的一株萎缩芽孢杆菌，并开发成微生态制剂，有效避免不同来源益生菌菌株之间的差异，保证微生态制剂的安全性和高效性，对海参健康养殖有现实意义。 

根据来源于自然，回归自然的原则，筛选与原宿主、原生境、原微生态区系、原微生物种群相适应的菌种是开发微生态制剂的最好途径。面对目前海参专用微生态制剂匮乏的局面，从海参肠道筛选益生菌并开发成微生态制剂，避免了不同菌株之间的差异，保证微生态制剂的安全性和高效性。因此，从海参肠道中分离土著益生菌，通过对相关菌株的配伍达到抗菌、免疫、促生长的多重效果，对海参健康养殖有现实意义。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供适应于海参肠道的萎缩芽孢杆菌菌株，并给出以该菌株制备微生物制剂的生产方法和该制剂在海参养殖中的使用方法。本发明微生物制剂作为饲料添加剂，能提高海参特定生长率、降低海参死亡率、增强海参的免疫能力和肠道的消化酶活力，同时提高海参的抗病力，达到了抗菌、免疫、促生长多重效果，可减少和取代抗生素的使用，对提高养殖成活率和产品质量，保障该产业的稳产、高产具有十分重要的意义。 

为解决上述技术问题，本发明提供了一种萎缩芽孢杆菌菌株Aj080319IA-12，所述菌株分离于野生刺参肠道，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2010316。 

为解决上述技术问题，本发明还提供了一种饲料添加剂，包括：萎缩芽孢杆菌菌株Aj080319IA-12，所述菌株分离于野生刺参肠道，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2010316。 

所述饲料添加剂的制备方法可以包括以下步骤： 

A.平板培养复壮：将低温保存的萎缩芽孢杆菌菌株Aj080319IA-12接种于TSB固体平板培养基上，于20～35℃培养12～36h，使菌种复壮并形成单菌落；然后挑取单菌落接种于TSB斜面培养基上，于20～35℃培养12～36h； 

B.种子液的制备：将步骤A培养的菌种用5～30‰灭菌的生理盐水制成1×10⁵CFU/mL的菌悬液，以2～10％的接种量接种于TSB液体培养基中，20～35℃，100～200rpm振荡培养18～20h，获得种子液； 

C.发酵培养：将步骤B中的种子液以2～10％的接种量接种于发酵培养基中，20～35℃，100～200rpm振荡培养50～150h，至活菌数为0.2～8×10⁹CFU/mL，中止发酵； 

所述的发酵培养基的组分及其重量百分比分别为：葡萄糖1～5％，大豆粉饼1～5％，氯化钠1～3％，其余为水； 

D.微生物制剂的制备：向步骤C的发酵液中加入沸石粉，每100mL发酵液中加入5～30g沸石粉，100～200rpm振荡20～60min后静止20～60min， 将上述发酵液于4℃6000rpm离心20min，弃上清，每100g沉淀中加入20～40g沸石粉混匀后，于30～60℃烘干2～5h。 

所述饲料添加剂优选为用于海参的饲料添加剂，添加剂量可以为海参饲料总重量的0.5～7‰。 

所述饲料添加剂可以为固态粉状制剂。 

为解决上述技术问题，本发明又提供了一种微生物制剂，所述微生物制剂的制备方法包括以下步骤：